[發明專利]一種鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201711204097.8
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN108118101A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 朱小甫;吳旭錦
• 申請（專利權）人: 咸陽職業技術學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 西安睿通知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 61218
• 代理人: 惠文軒

本發明提供了一種鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒，包括裂解液、擴增反應混合液、陰性對照和陽性對照；其中，裂解液的成分為DNAiso Reagent；擴增反應混合液包含滅菌三蒸水、PCR Buffer、dNTP、POX?F上游引物、POX?R下游引物、CPS?F上游引物、CPS?R下游引物、PiHV?F上游引物、PiHV?R下游引物和rTaq DNA聚合酶；陰性對照為滅菌三蒸水；陽性對照為鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒陽性質粒混合物。該試劑盒靈敏度高、特異性好、穩定性高、結果直觀，其檢測方法易于操作，能大幅縮短檢測時間，為臨床控制鴿痘、鴿衣原體與鴿皰疹病毒感染提供有力的技術手段。

技術領域

本發明涉及動物醫學動物疫病分子生物學診斷領域，具體涉及一種鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒及其檢測方法。

背景技術

鴿痘(Pigeonpox，POX)是由鴿痘病毒引起的鴿的病毒性傳染病。臨床分為皮膚型和黏膜型，本病毒主要通過皮膚或粘膜的傷口侵入體內，傳染媒介是某些吸血昆蟲尤其是蚊子。其特征是體表無羽毛部位皮膚出現散在的、結節狀的痘疹(皮膚型)，或上呼吸道、嚎角、口腔、咽喉和食道茹膜出現形成一層黃白色干酪樣偽膜(黏膜型)，因而影響運動、吞咽、呼吸，極易造成患病鴿因饑餓或窒息而死亡。

鴿衣原體病是由鸚鵡熱嗜衣原體(Chlamydophila psittaci,Cps)感染鴿引起不同征候群的一種接觸性傳染病，臨床上以肺炎、心包炎、氣囊炎、結膜炎為特征，又稱單眼傷風，是危害養鴿業比較嚴重的一種傳染病。

鴿皰疹病毒(Pigeon herpesvirus,PiHV)屬于禽皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科馬立克氏病毒屬成員。自然感染鴿臨床表現為厭食、精神不振，以結膜炎和鼻炎為特征。剖檢可見上呼吸道發炎，肝臟、脾臟、腎臟及胰臟壞死，肝臟表面可見小的壞死點。皰疹病毒對養鴿業造成較為嚴重的經濟損失。

PCR技術在動物疫病快速診斷中得到了廣泛應用，在鴿病診斷上也有報道，但都是進行單個傳染病診斷，在檢測時效和經濟成本上仍有很大的提升空間。目前尚未有診斷鴿痘病毒、鴿衣原體的試劑盒，以及鴿痘病毒、鴿衣原體與鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒，臨床上無法快速診斷以上三種病毒，三種病毒的檢測周期長、成本高。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒及其檢測方法，該試劑盒靈敏度高、特異性好、穩定性高、結果直觀，其檢測方法易于操作、方便快捷，能大幅縮短檢測時間，為臨床控制鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒感染提供有力的技術手段。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現。

(一)一種鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒三重PCR診斷試劑盒，包括裂解液、擴增反應混合液、陰性對照和陽性對照；其中，所述裂解液的成分為DNAiso Reagent；所述擴增反應混合液包含滅菌三蒸水、10×PCR Buffer、dNTP、POX-F上游引物、POX-R下游引物、CPS-F上游引物、CPS-R下游引物、PiHV-F上游引物、PiHV-R下游引物和rTaq DNA聚合酶；所述陰性對照為滅菌三蒸水；所述陽性對照為鴿痘、鴿衣原體和鴿皰疹病毒陽性質粒混合物。

優選的，所述POX-F上游引物的序列為：5’-GACTCTAGTCTACACCACTGCCT-3’；所述POX-R下游引物的序列為：5’-AAAATAATGGAACTACATAGTA-3’；所述CPS-F上游引物的序列為：5’-ATTTTCTGCACCTTAGGGGCAT-3’；所述CPS-R下游引物的序列為：5’-ATATTCAATCTGTAAGACAGG-3’；所述PiHV-F上游引物的序列為：5’-GCGACAGGATCGTGGCCATCGA-3’；所述PiHV-R下游引物的序列為：5’-AAGTACTCGCAGAACCGCTGAC-3’。