[發明專利]雙黃連注射液中大分子物質的檢測方法

在審

• 申請號: 201711203766.X
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN109813811A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 蹇小兵;何翔;焦玉紅
• 申請（專利權）人: 多多藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了雙黃連注射液中大分子物質的檢測方法，包括凝膠色譜法和MALDI?TOF/TOF法，兩種檢測方法可以對實驗結果進行相互驗證，能夠簡單、快捷、全面的檢測雙黃連注射液中的大分子物質；從凝膠色譜法的結果可以得出3批次雙黃連注射液中未檢測出分子量超過5800的大分子；由MALDI?TOF/TOF結果可以得出雙黃連注射液中分子量超過m/z1000的物質相對峰面積很弱，離子強度大的集中在m/z100?m/z300和m/z400?m/z550。

技術領域

本發明涉及醫藥領域，特別涉及雙黃連注射液中大分子物質的兩種檢測方法。

背景技術

中藥注射劑的發展經歷了半個多世紀，形成了一批在臨床治療危急重癥中療效突出的中藥大品種。中藥注射液給藥方式為靜脈注射，起效快，但是其化學成分復雜，且多為大分子物質，這些大分子物質既有免疫原性又具有免疫反應性，因此具有致敏的可能性。根據國家食品藥品監督管理局出臺的“中藥注射劑安全性再評價質量控制要點”，明確要求對于具體品種的工藝條件下可能存在、而質量研究中未檢出的大類成分，應建立排除性檢查方法，必要時應建立高分子量物質檢查項。大分子檢測目前沒有公認方法，由于各儀器檢測方法不同，易造成檢測的漏檢，本發明采用兩種方法對中藥注射劑雙黃連注射液中大分子物質進行測定研究。

發明內容

本發明的目的在于提供兩種雙黃連注射液中大分子物質的檢測方法。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

本發明雙黃連注射液中大分子物質的檢測方法為凝膠色譜法和MALDI-TOF/TOF法，方法包括如下步驟：

a.凝膠色譜法

色譜條件：色譜柱TSK GEL G2000SWXL 7.8*300mm；流動相8-12％乙腈溶液；流速0.8-1.0ml/min；柱溫3040℃；進樣量10-20μl；檢測波長214nm；

標準品溶液的制備：精密稱取相對分子量為12300的細胞色素C對照品，置于量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，得終濃度為0.1-0.5mg/ml的溶液；精密稱取相對分子量為5800的豬胰島素對照品，置于量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，得終濃度為0.1-0.5mg/ml的溶液；

供試品溶液的制備：分別取不同批號的雙黃連注射液，稀釋3-8倍，即得供試品溶液；

測定方法：取標準分子量溶液和供試品溶液各10-20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并根據各組分的峰面積按歸一化法計算各組分的百分含量。

該方法中所述色譜條件優選為：色譜柱為TSK GEL G2000SWXL 7.8*300mm；流動相10％乙腈溶液；流速1.0ml/min；柱溫35℃；進樣量20μl；檢測波長214nm。

b.MALDI-TOF/TOF法

儀器AB4700型MALDI-TOF/TOF；正離子模式；離子源加速電壓10-30KV；檢測條件N2激光源；波長337nm；激光頻率：180-220Hz；離子延遲提取時間280-350ns；質譜信號單次掃描累加1800-2200次；使用peptide II standard kit(Bruker)離子峰校正(m/z400-m/z4000)；質量掃描范圍m/z100-m/z1000，m/z500-m/z5000；檢測方式：線性方式(飛行管長1.6m)；基質CHCA；將樣品溶液與基質CHCA按0.5∶1～2∶1混勻后取1μl直接點靶；上線性正離子模式下檢測。