[發明專利]一種小血藤功能性有效成分的檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201711203076.4
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107976498B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 趙子劍;趙暢;梁玉蘭;諸葛樹彬;劉小波;嚴麗瑩;王斌
• 申請（專利權）人: 懷化學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 韓曉娟

1.一種小血藤功能性有效成分的檢測方法，其特征在于，所述的小血藤功能性有效成分的檢測方法在檢測小血藤或者含小血藤中成藥中蘆丁、五味子甲素和五味子乙素含量的應用，包括以下步驟：

S1，分別制備蘆丁、五味子甲素和五味子乙素的標準品溶液：

S2，制備供試品溶液

稱取小血藤10-10.5g，加入甲醇45-55mL，超聲30-40min，冷卻，過濾，收集濾液并濃縮，得到濃縮液；將濃縮液轉移于容量瓶中，加甲醇定容至，搖勻，過濾，收集的濾液再用微孔濾膜過濾，收集微孔濾膜過濾后的濾液即為供試品溶液；

S3，HPLC檢測

色譜條件：色譜柱為Symmetryshield Rp18 4.6mm×250mm色譜柱；以甲醇-1％冰醋酸溶液為流動相，梯度洗脫90min，洗脫各時段對應的洗脫液中甲醇體積分數分別為：0-20min時為20％；20-40min時為40％；40-60min時為60％；60-80min時為80％，80-90min時為100％；流速為1mL/min，檢測波長為257nm；

其中，1％冰醋酸溶液中冰醋酸的體積分數為1％，溶劑為雙蒸水。

2.根據權利要求1所述的小血藤功能性有效成分的檢測方法，其特征在于，S1中，蘆丁標準品溶液制備方法如下：精確稱取蘆丁標準品0.0091g于10mL容量瓶中，加入甲醇定容至10mL，即得0.91mg/mL的蘆丁標準品溶液；

五味子甲素標準品溶液制備方法如下：精確稱取五味子甲素標準品0.0043g于10mL容量瓶中，加入甲醇定容至10mL，即得0.43mg/mL的五味子甲素標準品溶液；

五味子乙素標準品溶液制備方法如下：精確稱取五味子乙素標準品0.0010g于10mL容量瓶中，加入甲醇定容至10mL，即得0.10mg/mL的五味子乙素標準品溶液。

3.根據權利要求1所述的小血藤功能性有效成分的檢測方法，其特征在于，S2的具體步驟為：

稱取小血藤10-10.5g，置于150mL具塞錐形瓶中，加入甲醇約50mL，超聲30min，超聲功率為180W，超聲頻率為40kHz，自然冷卻，快速定性濾紙過濾，收集濾液并濃縮，得到濃縮液；將濃縮液轉移于50mL的容量瓶中，加甲醇定容至50mL，搖勻，快速定性濾紙過濾，收集的濾液再用微孔濾膜過濾，微孔濾膜的微孔直徑為φ0.45μm，收集微孔濾膜過濾后的濾液即為供試品溶液。

4.根據權利要求1所述的小血藤功能性有效成分的檢測方法，其特征在于，S3的具體步驟為：

色譜條件：色譜柱為Symmetryshield Rp18 4.6mm×250mm色譜柱；以甲醇-1％冰醋酸溶液為流動相，梯度洗脫90min，洗脫各時段對應的洗脫液中甲醇體積分數分別為：0-20min時為20％；20-40min時為40％；40-60min時為60％；60-80min時為80％，80-90min時為100％；使用前流動相采用超聲處理脫氣，并用微孔直徑為φ0.45μm的微孔濾膜過濾；流速為1mL/min，檢測波長為257nm；

其中，1％冰醋酸溶液中冰醋酸的體積分數為1％，溶劑為雙蒸水。