[發明專利]一種蘇鐵無性快速繁殖的方法

在審

• 申請號: 201711201013.5
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107743871A
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 李海飛
• 申請（專利權）人: 廣西北流森藝瓷業有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙)45123
• 代理人: 黃南概

1.一種蘇鐵無性快速繁殖的方法，其特征在于：包括外植體處理、誘導培養、增殖培養和生根培養，選取生長健壯無病蟲害的蘇鐵半木質化枝條作為外植體，對外植體進行洗凈滅菌消毒處理后，接種于誘導培養基中培養獲得蘇鐵初始芽，再將蘇鐵初始芽轉接至增殖培養基中進行增殖培養，最后將分化出的長1-2cm的叢生芽轉接到生根培養基中培養獲得生根蘇鐵；主要包括如下步驟：

（1）外植體處理：選取生長健壯無病蟲害的蘇鐵半木質化枝條作為外植體，然后修剪成莖段，用純凈水沖洗外植體2-3次，然后在體積濃度1%洗衣粉溶液中浸泡30-40min，用清水洗凈后用加有兩滴吐溫的體積濃度0.15 % HgCl2溶液對外植體浸泡15-20min進行滅菌消毒，最后用無菌水沖洗干凈外植體后，置于無菌濾紙上吸干水，備用；

（2）誘導培養：將步驟（1）處理后的生長健壯無病蟲害的蘇鐵半木質化枝條的莖段接種到誘導培養基中培養，然后光照培養，光照時間12h/d，光照強度500-1000lx，培養溫度22-28℃，培養時間20-22d，培養得到蘇鐵初始芽；

（3）增殖培養：將步驟（2）中誘導得到的蘇鐵初始芽轉接到增殖培養基中，光照時間10-12h/d，光照強度3000-3500lx，培養溫度22-28℃，培養時間20-25d，分化出芽；

（4）生根培養：將步驟（3） 中分化出的芽長至1-2cm的叢生芽轉接到生根培養基中，光照時間12h/d，光照強度1500-2000lx，培養溫度22-28℃，培養時間20-30d，得到生根蘇鐵。

2.根據權利要求1所述的一種蘇鐵無性快速繁殖的方法，其特征在于：步驟（2）所述的誘導培養基的配方為：改良MS培養基+IAA 6.0-8.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L +VC 15 mg/L +多效唑30mg/L+VB₂ 15 mg/+瓊脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。

3.根據權利要求1所述的一種蘇鐵無性快速繁殖的方法，其特征在于：步驟（3）所述的增殖培養基的配方為：改良MS培養基+IAA 3.0-5.0 mg/L+NAA 1.5-2.0 mg/L+ZT 0.1-0.5 mg/L+谷氨酸 10 mg/L+多效唑30mg/L+瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

4.根據權利要求1所述的一種蘇鐵無性快速繁殖的方法，其特征在于：步驟（4）所述的生根培養基的配方為：改良MS培養基+IAA 1.5-2.0 mg/L+NAA 0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB₂ 20 mg+谷氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

5.根據權利要求2-4任一所述的一種蘇鐵無性快速繁殖的方法，其特征在于：所述的改良MS培養基的配方為：KNO₃ 1800 mg·L^-1；NH₄NO₃ 580 mg·L^-1；CaCl₂·2H₂O 330 mg·L^-1；MgSO₄·7H₂O 340 mg·L^-1；Ca(NO₃)₂·4H₂O 450 mg·L^-1；KH₂PO₄ 220 mg·L^-1；MnSO₄·H₂O 22.3 mg·L^-1；ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg·L^-1；CuSO₄·5H₂O 0.025 mg·L^-1；H₃BO₃ 6.2 mg·L^-1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.025 mg·L^-1；KI 0.83 mg·L^-1；CoCl₂·6H₂O 0.025 mg·L^-1；維生素B₁1.0 mg·L^-1；維生素B₆ 0.5 mg·L^-1；煙酸 0.5 mg·L^-1；甘氨酸 2.0 mg·L^-1；肌醇 200 mg·L^-1。