[發(fā)明專利]一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711200922.7
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN109832189A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳向陽;李海飛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西北流森藝瓷業(yè)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧深之意專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 45123
• 代理人: 黃南概

1.一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法，其特征在于：包括外植體處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，選取龍舌蘭珠芽作為外植體，對外植體進行洗凈滅菌消毒處理后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得龍舌蘭愈傷組織，再將龍舌蘭愈傷組織轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，最后將分化出的長1-2cm的叢生芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得生根龍舌蘭；主要包括如下步驟：

（1）外植體處理：選取龍舌蘭珠芽作為外植體，用純凈水沖洗外植體2-3次，然后在體積濃度0.1%代森鋅藍粉溶液中浸泡30-40min，用清水洗凈后用體積濃度0.15% VC溶液對外植體浸泡15-20min進行滅菌消毒，最后用無菌水沖洗干凈外植體后，置于無菌濾紙上吸干水，備用；

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將步驟（1）處理后的龍舌蘭珠芽的莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，先暗培養(yǎng)3-4 d，然后光照培養(yǎng)，光照時間12h/d，光照強度500-1000lx，培養(yǎng)溫度22-28℃，培養(yǎng)時間20-22d，培養(yǎng)得到龍舌蘭愈傷組織；

（3）增殖培養(yǎng)：將步驟（2）中誘導(dǎo)得到的龍舌蘭愈傷組織轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，光照時間10-12h/d，光照強度3000-3500lx，培養(yǎng)溫度22-28℃，培養(yǎng)時間20-25d，分化出芽；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3） 中分化出的芽長至1-2cm的叢生芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，光照時間12h/d，光照強度1500-2000lx，培養(yǎng)溫度22-28℃，培養(yǎng)時間20-30d，得到生根龍舌蘭。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟（2）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：改良LS培養(yǎng)基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L +VC 15 mg/L+ VB₂ 15 mg/+瓊脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟（3）所述的增殖培養(yǎng)基的配方為：改良LS培養(yǎng)基+6-BA 3.0-5.0 mg/L+NAA 1.5-2.0 mg/L+ZT 0.1-0.5mg/L +瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法，其特征在于：步驟（4）所述的生根培養(yǎng)基的配方為：改良LS培養(yǎng)基+6-BA 1.5-2.0 mg/L+NAA 0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB₂ 20 mg +瓊脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的一種龍舌蘭離體培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的改良LS培養(yǎng)基的配方為：NH₄NO₃ 670 mg/L+KNO₃ 1200mg/L+CaCl₂·2H₂O 250mg/L+MgSO_4.·7H₂O350 mg/L+KH₂PO₄ 220 mg/L+H₃BO₃ 8.8mg/L+MnSO_4.·4H₂O 22.3 mg/L+ZnSO₄·4H₂O 8.6 mg/L+KI0.56mg/L+Na₂MoO₄·H₂O 0.25 mg/L+CuSO_4.·5H₂O 0.025 mg/L+CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L+FeSO₄ 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 75 mg/L+煙酸 0.5 mg/L+鹽酸吡哆醇0.5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+鹽酸吡哆醇0 .5 mg/L。