[發明專利]一種手性雙芳基醇化合物的合成方法

有效

• 申請號: 201711200541.9
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN109837317B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 孫周通;劉保艷;劉貝貝;曲戈
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;C12N9/04;C12N15/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.醇脫氫酶或其相關生物材料在合成手性雙芳基醇化合物中的應用；

所述醇脫氫酶為醇脫氫酶TbSADH的突變體；

所述醇脫氫酶TbSADH氨基酸序列為SEQ ID No.4；

所述醇脫氫酶TbSADH的突變體為與SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相比，僅存在如下任一所示突變：A85G/I86A、A85G/I86A/W110A、S39T/A85G/I86A、A85G/I86A/G198D、A85G/I86A/W110A/G198D、A85G/I86A/L294A、A85G/I86A/C295A、△I86、△A85/△I86、△I86/W110A、△I86/L294A、△I86/C295A。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述手性雙芳基醇化合物為(S)-(4-氯苯基)吡啶-2-甲醇。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：能夠表達所述醇脫氫酶的核酸分子為如下(d1)-(d3)中任一：

(d1)與SEQ ID No.3相比，存在或僅存在如下任一所示的突變：C254G/A256G/T257C/T258A、C254G/A256G/T257C/T258A/T328G/G329C/G330C、T115A/G117C/C254G/A256G/T257C/T258A、C254G/A256G/T257C/T258A/G593A/C594T、C254G/A256G/T257C/T258A/T328G/G329C/G330C/G593A/C594T、C254G/A256G/T257C/T258A/C880G/T881C/A882G、C254G/A256G/T257C/T258A/T883G/G884C/C885A、△A256/△T257/△T258、△G253/△C254/△T255/△A256/△T257/△T258、△A256/△T257/△T258/T328G/G329C/G330C、△A256/△T257/△T258/C880G/T881C/A882G、△A256/△T257/△T258/T883G/G884C/C885A；

(d2)在(d1)所限定序列的5’端和/或3’端連接標簽編碼序列后得到的融合序列；

(d3)與(d1)或(d2)所限定的序列相比保有功能且編碼相同蛋白的隨機或/和定點誘變序列。

4.一種(S)-(4-氯苯基)吡啶-2-甲醇的合成方法，包括如下步驟：以醇脫氫酶作為生物酶催化底物生成(S)-(4-氯苯基)吡啶-2-甲醇；所述底物為(4-氯苯基)吡啶-2-甲酮；

所述醇脫氫酶為醇脫氫酶TbSADH的突變體；

所述醇脫氫酶TbSADH氨基酸序列為SEQ ID No.4；

所述醇脫氫酶TbSADH的突變體為與SEQ ID No.4所示的氨基酸序列相比，僅存在如下任一所示突變：A85G/I86A、A85G/I86A/W110A、S39T/A85G/I86A、A85G/I86A/G198D、A85G/I86A/W110A/G198D、A85G/I86A/L294A、A85G/I86A/C295A、△I86、△A85/△I86、△I86/W110A、△I86/L294A、△I86/C295A。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：在所述方法中，所述醇脫氫酶是以粗酶液、粗酶液凍干粉、純酶或全細胞的形式發生催化作用的。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述粗酶液、粗酶液凍干粉和純酶按照包括如下步驟的方法制備得到：在宿主細胞中表達所述醇脫氫酶，得到重組細胞；裂解所述重組細胞獲得所述粗酶液、粗酶液凍干粉或純酶；所述全細胞按照包括如下步驟的方法制備得到：在宿主細胞中表達所述醇脫氫酶，得到的重組細胞即為所述全細胞。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述重組細胞是按照包括如下步驟的方法制備獲得的：向所述宿主細胞到導入能夠表達所述醇脫氫酶的核酸分子，經誘導培養后獲得表達所述醇脫氫酶的所述重組細胞。