[發明專利]一種三葉青多糖的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201711200506.7
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107778376B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 邱彬;茹翌;郭隆華;林振宇;陳國南
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P3/10
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明屬于生物技術領域，具體涉及了中草藥三葉青多糖的制備及應用。以三葉青藤葉為原料，按照如下步驟依次實施：（1）熱水浸提；抽濾收集濾液；真空濃縮；濃縮液加入乙醇；收集沉淀，即三葉青粗多糖。（2）將粗多糖溶于水，加入Sevag試劑；攪拌后離心除蛋白層和有機層，重復此步操作多次至不出現蛋白為止；（3）將除蛋白后的多糖溶于去離子水中，通過DEAE?52離子交換層析和Sephadex G?100葡聚糖凝膠層析得到三葉青多糖單一組分。本發明所涉及的三葉青多糖，可顯著降低機體血糖血脂，改善機體內抗氧化酶酶活力水平，并對胰島具有一定修復作用，具有很好的藥用價值和市場價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種三葉青多糖的制備及其應用。

背景技術

三葉青（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg）正名三葉崖爬藤，又名金線吊葫蘆、蛇附子，生長于陰濕山坡、山谷等地帶，主要分布在我國東南。西南地帶。三葉青全草均可入藥，是我國著名的中草藥之一，具有顯著的藥用價值，如治療病毒性腦膜炎、支氣管炎、小兒高熱驚厥、預防以及治療癌癥等。

糖尿病分為一型糖尿病和二型糖尿病，其中一型糖尿病是指胰島素相對或絕對分泌不足，必須依賴胰島素維系生命，二型糖尿病是指胰島素抵抗或不敏感，患者具有典型的“三多一少”癥狀，即多食多飲多尿，體重減輕。隨著人民生活水平日益增長，我國患糖尿病的人數與日俱增。據統計，目前我國糖尿病病人人數高達9000多萬人，位居世界第一，二型糖尿病患者占據糖尿病患病人數的80%以上，且50%以上二型糖尿病患者具有一種或多種糖尿病并發癥。糖尿病并發癥包括高血壓、高血脂、心腦血管疾病等，嚴重損害人民的身體健康，因此防治糖尿病刻不容緩。

發明內容

本發明的目的在于提供一種三葉青多糖的制備及其應用。

為解決上述技術問題，本發明可以通過以下步驟實現。

所述三葉青多糖的制備，包括以下步驟：

（1）三葉青粗多糖的提取：

干燥三葉青經粉碎后用去離子水80℃煮提 3 小時；抽濾得濾液，濾液經過80度水浴濃縮至原體積的四分之一，加入5倍體積的無水乙醇，沉淀靜止過夜；5000轉/分離心10分鐘收集沉淀，經冷凍干燥后得粗多糖；

（2）Savag法除蛋白。

A1：向10wt%三葉青粗多糖水溶液中加入 Sevag 試劑充分攪拌1~2小時，；

B1：然后3500～4500 轉/分離心10～25分鐘，去除蛋白層和氯仿層，水層重復操作至不再出現蛋白層為止，所得水溶液經透析和冷凍干燥得到脫蛋白三葉青精多糖。

（3）三葉青精多糖的分級：

將5wt%脫蛋白三葉青多糖經DEAE- 纖維素離子交換層析柱分級；3倍柱體積的不同濃度氯化鈉溶液洗脫，收集0.3M氯化鈉洗脫液組分，經去離子水透析、冷凍干燥得到多糖級分。

步驟（2）中，Sevag 試劑包括正丁醇及氯仿；其中 ：正丁醇與氯仿的體積比為：1 ：4；

本發明方法制得的三葉青多糖組分經過Sephadex G-100凝膠洗脫鑒定為單一組分，其中單糖組成以及摩爾比率分別為Rha：Ara：Man：Glc：:Gal = 006：0.13：0.38：0.09：0.31。分子量為9×10⁴ ～ 10.0×10⁴Da。

本發明的顯著優點在于：

通過傳統水提醇沉方式提取多糖，提取條件簡單，提取成本低廉，其次通過兩步純化得到單一組分的多糖，便與后續進行降血糖活性的相關應用。

附圖說明