[發(fā)明專利]一種噬菌體保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711200242.5
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN109837251B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喬歡;徐旭凌;費文斌;胡懌林;肖逍;丁良;許文建;叢郁;陳海;刁偉程;周思翔;王衛(wèi)斌;沈嬋娟
• 申請（專利權(quán)）人: 菲吉樂科（南京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/92
• 代理公司: 北京市隆安律師事務(wù)所 11323
• 代理人: 劉東方

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種噬菌體保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明噬菌體保護(hù)劑包括：氯化鈉、硫酸鎂、氯化鈣、組氨酸、明膠、乳糖、海藻糖和余量的水。本發(fā)明室溫保護(hù)劑的噬菌體產(chǎn)品與傳統(tǒng)噬菌體制劑相比，具有穩(wěn)定性高、活性損傷小、保存時間長、保存條件低、原料簡單、成本較低等優(yōu)點，更適宜工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的噬菌體保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

病毒類生物制品多用于醫(yī)藥、農(nóng)林業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)等領(lǐng)域，對其細(xì)菌性病害進(jìn)行免疫防治。該類生物制品在存放和運輸過程中其活性受溫度影響較大，如口蹄疫病毒在4℃較穩(wěn)定，于-20℃特別是-50～-70℃下可存放數(shù)年，但于30℃下24h內(nèi)即失活。因此需用適宜的病毒保護(hù)劑以防止病毒在不同保存條件時失活，延長病毒存放期，保持病毒效價。目前的保護(hù)劑按機(jī)制分為兩大類：一類是滲透劑如DMSO、甘油、蔗糖等，可滲入細(xì)胞內(nèi)，降低因冷凍而增加的滲透壓防止細(xì)胞內(nèi)脫水，保護(hù)細(xì)胞因慢凍可能產(chǎn)生的破壞；另一類是非滲透劑如PVP、Piccoll、蛋白質(zhì)等，能防止細(xì)胞由外向內(nèi)滲漏溶質(zhì)，保護(hù)細(xì)胞在速凍和溶解時可能產(chǎn)生的損害。

我國現(xiàn)階段常用的生物制品的保護(hù)劑一般要求制品-15℃保存，2-8℃僅存3-6個月，常溫下需盡快用完。但在運輸不便、冷凍冷藏設(shè)施較差的環(huán)境下，易導(dǎo)致疫苗因運輸或保存原因而效價降低甚至失效，從而致使免疫失敗，疫病爆發(fā)，在阻礙畜牧業(yè)發(fā)展的同時，還造成了大量浪費和基金流失。因此、研制具有新新型的病毒類制品保護(hù)劑勢在必行。

噬菌體是一種通過結(jié)合細(xì)菌細(xì)胞表面特異位點以殺滅特異性細(xì)菌的病毒，主要化學(xué)成分為蛋白質(zhì)和核酸，在地球上廣泛存在。噬菌體具有較強(qiáng)的專一性及抑菌性，對耐藥性細(xì)菌具有良好的防治作用，同時不易損傷微生物群落，因此自20世紀(jì)初以來陸續(xù)被制成抑菌生物制劑使用。目前噬菌體制劑通常以潑灑、噴涂、澆灌等方式使用，極少用于注射，由于其用量較大，其產(chǎn)品通常不采用凍干法進(jìn)行保存，多以液體形式存放于2-8℃。但其同樣有著在養(yǎng)殖地較偏遠(yuǎn)、運輸及存儲時條件差的情況下造成難以長期保持低溫保存，從而致使噬菌體制劑失活的技術(shù)缺陷。因此研究開發(fā)在室溫下保持活性的噬菌體制劑產(chǎn)品是非常有意義的和必要的，目前針對噬菌體產(chǎn)品保護(hù)劑的篩選以及對于室溫條件下保護(hù)噬菌體活性的方法更是鮮見報道。

研究開發(fā)新的噬菌體保護(hù)劑配方，尋找室溫下可最大化保存噬菌體活性的保護(hù)劑是本技術(shù)領(lǐng)域?qū)τ谑删w產(chǎn)品工業(yè)生產(chǎn)及應(yīng)用中急需解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上技術(shù)現(xiàn)狀，本發(fā)明提供了一種新的噬菌體保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明保護(hù)劑降低了噬菌體制劑對溫度保存條件的要求，提高并延長了噬菌體制劑活性。

本發(fā)明保護(hù)劑由以重量百分含量計的以下組分組成：氯化鈉0.8-2.2％、硫酸鎂2-3％、氯化鈣1-2.2％、組氨酸1-3％、明膠1.2-2.8％、乳糖4-8％、海藻糖4-6％和余量為水。

作為實施方案之一，本發(fā)明所述保護(hù)劑由以重量百分含量計的以下組分組成：氯化鈉1.5％、硫酸鎂2.5％、氯化鈣1.6％、組氨酸2％、明膠2％、乳糖6％、海藻糖5％，和余量為水。作為實施方案之一，本發(fā)明所述的水為去離子水。

作為實施方案之一，本發(fā)明所述的噬菌體保護(hù)劑包括保護(hù)劑A液和保護(hù)劑B液；所述保護(hù)劑A液包括氯化鈉、硫酸鎂、氯化鈣和明膠，作為實施方案之一，所述保護(hù)劑A液包括以重量百分含量計、氯化鈉0.8-2.2％、硫酸鎂2-3％、氯化鈣1-2.2％和明膠1.2-2.8％；所述保護(hù)劑B液包括組氨酸、乳糖和海藻糖，作為實施方案之一，所述保護(hù)劑B液包括以重量百分含量計，組氨酸1-3％、乳糖4-8％和海藻糖4-6％。

本發(fā)明還提供一種噬菌體保護(hù)劑的制備方法，所述方法包括：

a.將上述以重量百分含量計的氯化鈉、硫酸鎂、氯化鈣和明膠溶解于水中，121℃滅菌15min，4℃儲存?zhèn)溆茫吹帽Ｗo(hù)劑A液；