[發明專利]水產品中利福平殘留的超高效液相色譜串聯質譜快速測定方法

在審

• 申請號: 201711199298.3
• 申請日: 2017-11-26
• 公開（公告）號: CN107941980A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 李詩言;王揚;丁雪燕;吳洪喜;何中央
• 申請（專利權）人: 浙江省水產技術推廣總站
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司33212
• 代理人: 金祺

1.適用于水產品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜快速測定方法，其特征在于包括以下步驟：

(A)、樣品提取：

稱取2.5g均漿樣品于離心管中，加入含有0.25μg利福平穩定同位素內標物的溶液，靜置后加入2～3g無水硫酸鈉后采用7.5～12.5mL乙腈作為試劑提取，漩渦震蕩提取后，于4±1℃高速離心，移取上清液至比色管中，用乙腈定容至10mL～15mL；

(B)、樣品凈化：

移取步驟(A)所得的提取液直接上樣至Oasis PRiME HLB固相萃取柱上，收集全部流出液后于4±℃高速離心，過0.2μm濾膜，得樣品待測液；

(C)、帶有利福平穩定同位素內標的利福平濃度梯度標準工作溶液的制備：

帶有利福平穩定同位素內標的利福平濃度梯度標準工作溶液的制備方法為：先配制利福平濃度為0.0005～0.100μg/mL濃度梯度的利福平乙腈溶液作為標準溶液，然后再上述標準溶液中分別添加利福平穩定同位素內標工作溶液，從而使所得的帶有利福平穩定同位素內標的利福平濃度梯度標準工作溶液中，利福平穩定同位素內標的濃度均為0.025μg/mL；

(D)、液相色譜-串聯四級桿質譜儀測定：

將帶有利福平穩定同位素內標的利福平濃度梯度標準工作溶液以及樣品待測液在相同的色譜、質譜條件下依次進行測定；

(E)、定性依據和定量分析：

采用串聯四級桿質譜的多反應監測模式(MRM)采集利福平的定量離子對和定性離子對信息；以多反應監測提取的利福平定量離子對與利福平穩定同位素內標物離子對的峰面積比值為縱坐標，利福平的質量濃度為橫坐標進行線性回歸分析，將樣品的利福平與內標物峰面積比值帶入線性方程，獲得樣品中目標物的含量。

2.根據權利要求1所述的適用于水產品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜快速測定方法，其特征在于所述步驟(C)中：

色譜條件為：

C18分析色譜柱2.1×100mm，2.6μm；柱溫：40℃；流速：0.30mL/min；進樣量：2μL；洗脫梯度：0～1.0min，30％B；1.0～5.0min，30％～90％B；5.0～6.0min，90％B；6.0～6.5min，90％～30％B；6.5～8.5min，30％B；

流動相A為在5mmol/L乙酸銨水溶液且含0.02％的甲酸，流動相B為純乙腈；

質譜條件為：

離子源為電噴霧離子源；檢測方式為正離子多反應監測(MRM)模式；電噴霧電壓為5500kV；離子源溫度為500～600℃；霧化器(GS1)壓力為210kPa；輔助氣(GS2)壓力為280kPa；氣簾氣(CUR)壓力為105kPa；利福平及同位素內標氘代利福平的質譜信息如下表；

*定量離子。

3.根據權利要求2所述的適用于水產品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜快速測定方法，其特征在于：

所述步驟(C)中，利福平穩定同位素內標工作溶液為濃度為1.0μg/mL的利福平-D3乙腈溶液。

4.根據權利要求3所述的適用于水產品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜快速測定方法，其特征在于：

所述步驟(A)的高速離心為4000～6000r/min離心2～8分鐘，離心溫度為4±1℃；

所述步驟(B)的高速離心為10000～14000r/min高速離心8～12min，離心溫度為4±1℃。

5.根據權利要求3所述的適用于水產品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯質譜快速測定方法，其特征在于：

所述加入含有0.25μg利福平穩定同位素內標物的溶液為，加入濃度為1.0μg/mL利福平穩定同位素內標工作液0.25mL。