[發(fā)明專利]水產(chǎn)品中利福平殘留的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711199298.3
• 申請(qǐng)日: 2017-11-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107941980A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李詩(shī)言;王揚(yáng);丁雪燕;吳洪喜;何中央
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司33212
• 代理人: 金祺

1.適用于水產(chǎn)品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟：

(A)、樣品提取：

稱取2.5g均漿樣品于離心管中，加入含有0.25μg利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)物的溶液，靜置后加入2～3g無(wú)水硫酸鈉后采用7.5～12.5mL乙腈作為試劑提取，漩渦震蕩提取后，于4±1℃高速離心，移取上清液至比色管中，用乙腈定容至10mL～15mL；

(B)、樣品凈化：

移取步驟(A)所得的提取液直接上樣至Oasis PRiME HLB固相萃取柱上，收集全部流出液后于4±℃高速離心，過(guò)0.2μm濾膜，得樣品待測(cè)液；

(C)、帶有利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的利福平濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：

帶有利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的利福平濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備方法為：先配制利福平濃度為0.0005～0.100μg/mL濃度梯度的利福平乙腈溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后再上述標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別添加利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，從而使所得的帶有利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的利福平濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中，利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的濃度均為0.025μg/mL；

(D)、液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀測(cè)定：

將帶有利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)的利福平濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以及樣品待測(cè)液在相同的色譜、質(zhì)譜條件下依次進(jìn)行測(cè)定；

(E)、定性依據(jù)和定量分析：

采用串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)采集利福平的定量離子對(duì)和定性離子對(duì)信息；以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)提取的利福平定量離子對(duì)與利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)物離子對(duì)的峰面積比值為縱坐標(biāo)，利福平的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，將樣品的利福平與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值帶入線性方程，獲得樣品中目標(biāo)物的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適用于水產(chǎn)品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法，其特征在于所述步驟(C)中：

色譜條件為：

C18分析色譜柱2.1×100mm，2.6μm；柱溫：40℃；流速：0.30mL/min；進(jìn)樣量：2μL；洗脫梯度：0～1.0min，30％B；1.0～5.0min，30％～90％B；5.0～6.0min，90％B；6.0～6.5min，90％～30％B；6.5～8.5min，30％B；

流動(dòng)相A為在5mmol/L乙酸銨水溶液且含0.02％的甲酸，流動(dòng)相B為純乙腈；

質(zhì)譜條件為：

離子源為電噴霧離子源；檢測(cè)方式為正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式；電噴霧電壓為5500kV；離子源溫度為500～600℃；霧化器(GS1)壓力為210kPa；輔助氣(GS2)壓力為280kPa；氣簾氣(CUR)壓力為105kPa；利福平及同位素內(nèi)標(biāo)氘代利福平的質(zhì)譜信息如下表；

*定量離子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適用于水產(chǎn)品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法，其特征在于：

所述步驟(C)中，利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液為濃度為1.0μg/mL的利福平-D3乙腈溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適用于水產(chǎn)品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法，其特征在于：

所述步驟(A)的高速離心為4000～6000r/min離心2～8分鐘，離心溫度為4±1℃；

所述步驟(B)的高速離心為10000～14000r/min高速離心8～12min，離心溫度為4±1℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適用于水產(chǎn)品中利福平藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速測(cè)定方法，其特征在于：

所述加入含有0.25μg利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)物的溶液為，加入濃度為1.0μg/mL利福平穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)工作液0.25mL。