[發明專利]一種靶向EGFR的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711197151.0
• 申請日: 2017-11-25
• 公開（公告）號: CN109836497A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 曾瀅;楊忠華
• 申請（專利權）人: 深圳賓德生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發明提供了一種靶向EGFR的單鏈抗體，所述靶向EGFR的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向EGFR的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，本發明還提供了一種包括所述靶向EGFR的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞，所述靶向EGFR的嵌合抗原受體可以專一性的靶向EGFR，促進T細胞在患者體內的擴增，可以高效且特異性的殺傷腫瘤細胞，同時人源化單鏈抗體制得的靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞更好的維持細胞的活力和殺傷力，并且對正常細胞不會造成損傷。本發明還提供了一種靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

技術領域

本發明涉及醫學生物領域，特別涉及一種靶向EGFR的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

人上皮生長因子受體(EGFR)是人上皮生長因子的主要受體。在激活后，EGFR會發生同源二聚，或與其他人上皮生長因子受體家族的成員發生異源二聚，從而誘導EGFR細胞內結構的自磷酸化，并激活下游通路例如絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路等，并介導細胞擴增。研究表明EGFR是一個在肺癌等多種實體瘤細胞中表達或異常表達，而在普通細胞中表達很微弱的細胞表面抗原。EGFR與腫瘤細胞的增殖、腫瘤侵襲、轉移及細胞凋亡的抑制有關。在癌癥中，變異的EGFR得到持續性的激活，從而引起細胞無節制的擴增并最終導致癌癥。因此，EGFR是一個癌癥特異性靶點。

免疫細胞治療是現有科技中唯一有可能徹底清除癌細胞的方法，其治療腫瘤具有特異性強、幾乎無毒副作用的巨大優勢彌補了傳統療法的弊端，在國內外已經用于臨床治療惡性腫瘤，嵌合抗原受體T細胞技術(CAR-T)為當前過繼性細胞回輸治療技術最新的免疫細胞技術之一，因其能夠在體內能激活自身免疫系統，持續性地靶向腫瘤細胞進行殺傷，最終達到清除惡性腫瘤細胞的目的而受到廣泛的關注和研究。目前還未有靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞的制備和研究。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種靶向EGFR的單鏈抗體，以及包括所述靶向E GFR的單鏈抗體的靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞。所述靶向EGFR的嵌合抗原受體可以專一性的靶向EGFR，促進T細胞在患者體內的擴增，可以高效且特異性的殺傷腫瘤細胞，同時人源化單鏈抗體制得的靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞能夠更好的維持嵌合抗原受體T細胞的活力和殺傷力，并且對正常細胞不會造成損傷。本發明還提供了一種靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應用。

第一方面，本發明提供了一種靶向EGFR的單鏈抗體，所述靶向EGFR的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向EGFR的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。

可選的，所述靶向EGFR的單鏈抗體編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可選的，所述靶向EGFR的單鏈抗體編碼基因應該考慮簡并堿基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的編碼基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保護范圍還應該保護與SEQ ID NO:2具有堿基簡并性質的核苷酸序列，這些核苷酸序列對應的氨基酸序列仍然為SEQ ID NO:1。

本發明第一方面提供的所述靶向EGFR的單鏈抗體能夠與EGFR蛋白發生特異性結合，對腫瘤細胞特別是表達EGFR的實體瘤細胞具有較強的親和活性。

第二方面，本發明提供了一種靶向EGFR的嵌合抗原受體T細胞，包括靶向E GFR的嵌合抗原受體CAR-EGFR，所述CAR-EGFR包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向EGFR的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列，其中所述靶向EGFR的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“從氨基端到羧基端順次連接”具體為：所述靶向EGFR的單鏈抗體的氨基酸序列的羧基端與所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的氨基端相連，所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的羧基端與所述跨膜區的氨基酸序列的氨基端相連，所述跨膜區的氨基酸序列的羧基端與所述胞內信號區的氨基酸序列的氨基端相連。