[發明專利]一種通過對核酸酶系統敲除以調控體外生物合成活性的方法

有效

• 申請號: 201711194472.5
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN108949801B
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 郭敏;薛銀鴿;代田純;姜靈軒;鄭竹霞;柴智;劉帥龍;于雪
• 申請（專利權）人: 康碼（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N1/19;C12N15/67;C12R1/645
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• 代理人: 暫無信息

1.一種體外的無細胞的蛋白合成體系，其特征在于，所述無細胞的蛋白合成體系包括：

(a) 酵母細胞提取物；

(b) 聚乙二醇；

(c) 任選的外源蔗糖；和

(d) 任選的溶劑，所述溶劑為水或水性溶劑，

其中，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤10%，所述EXN53蛋白序列如SEQ IDNO.:6所示。

2.如權利要求1所述的蛋白合成體系，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53的含量≤5%。

3.如權利要求1所述的蛋白合成體系，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53的含量≤2%。

4.如權利要求1所述的蛋白合成體系，其特征在于，所述EXN53來源于選自下組的一種或多種來源的酵母：畢氏酵母、克魯維酵母。

5.如權利要求1所述的蛋白合成體系，其特征在于，所述EXN53來源于克魯維酵母。

6.如權利要求1所述的蛋白合成體系，其特征在于，編碼所述EXN53蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示。

7.一種酵母細胞提取物，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤10%，所述EXN53蛋白序列如SEQ ID NO.:6所示。

8.如權利要求7所述的酵母細胞提取物，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤5%。

9.如權利要求7所述的酵母細胞提取物，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤2%。

10.一種權利要求1-6任一項所述的體外的無細胞的蛋白合成體系的生產方法，其特征在于，包括步驟：

將(a) 酵母細胞提取物與 (b) 聚乙二醇；(c) 任選的外源蔗糖；和(d) 任選的溶劑混合，從而獲得權利要求1-6任一項所述的體外的無細胞的蛋白合成體系，其中，所述溶劑為水或水性溶劑，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤10%。

11.如權利要求10所述的生產方法，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤5%。

12.如權利要求10所述的生產方法，其特征在于，所述酵母細胞提取物中的EXN53蛋白的含量≤2%。

13.一種體外合成蛋白的方法，其特征在于，包括步驟：

(i) 提供權利要求1-6任一項所述的體外的無細胞的蛋白合成體系，并加入外源的用于指導蛋白質合成的DNA分子，其中；所述蛋白合成體系中的EXN53蛋白的含量≤10%；

(ii) 在適合的條件下，孵育步驟(i)的蛋白合成體系一段時間，從而合成由所述外源DNA編碼的蛋白質。

14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，所述蛋白合成體系中的EXN53蛋白的含量≤5%。

15.如權利要求13所述的方法，其特征在于，所述蛋白合成體系中的EXN53蛋白的含量≤2%。

16.如權利要求13-15任一項所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括：(iii) 任選地從所述蛋白合成體系中，分離或檢測所述的外源DNA編碼的蛋白質。

17.一種工程菌株，其特征在于，所述菌株為克魯維酵母菌株，并且所述菌株中的EXN53基因的表達或活性被降低，EXN53蛋白序列如SEQ ID NO.:6所示。

18.一種權利要求17所述的工程菌株的用途，其特征在于，用于提高體外蛋白合成效率。