[發明專利]一種藥物組合物及其應用有效
| 申請號： | 201711194292.7 | 申請日： | 2017-11-24 |
| 公開（公告）號： | CN107929753B | 公開（公告）日： | 2020-02-07 |
| 發明（設計）人： | 高大雙;楊帆;劉運輝 | 申請（專利權）人： | 深圳先進技術研究院 |
| 主分類號： | A61K48/00 | 分類號： | A61K48/00;A61K31/551;A61K47/46;A61P19/08;A61P25/00 |
| 代理公司： | 11332 北京品源專利代理有限公司 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 518055 廣東省深圳*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 藥物 組合 及其 應用 | ||
1.一種藥物組合物在制備增加骨量的藥物中的用途，其特征在于，所述藥物組合物包括攜帶化學遺傳基因的腺相關病毒和激活化學遺傳基因的藥物；所述化學遺傳基因為hM4Di；所述激活化學遺傳基因的藥物為疊氮平-N-氧化物溶液。
2.一種用于非治療目的的增加骨量的方法，其特征在于，采用如權利要求1所述的藥物組合物，具體包括如下步驟：
(1)構建攜帶化學遺傳基因的腺相關病毒；
(2)將步驟(1)得到的腺相關病毒感染TH神經元細胞，進行驗證并標記胞體位置；
(3)將步驟(1)得到的腺相關病毒感染小鼠骨髓，再在腹腔注射疊氮平-N-氧化物溶液。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述腺相關病毒的構建方法如下：
(1’)構建質粒：將化學遺傳基因、紅色熒光基因和神經細胞特異性啟動子構建在pAAV質粒上，得到pAAV-syn DIO-hM4Di-mCherry；
(2’)轉染細胞：將步驟(1’)得到的質粒與腺相關病毒的病毒包裝質粒pHelper和pAAV-RC9共轉293FT細胞；
(3’)收獲病毒：轉染后20-30h換液，換液后12-20h進行超速離心破膜，將破膜后懸液通過20％的蔗糖濾柱，收集上清，得到所述腺相關病毒。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3’)所述轉染的時間為24h。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3’)所述換液后16h進行超速離心破膜。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2’)所述共轉的轉染試劑濃度為每200000個細胞用5-8mg/L的脂質體。
7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2’)所述共轉的轉染試劑濃度為每200000個細胞用6mg/L的脂質體。
8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3’)所述離心的轉速為4000-6000g。
9.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3’)所述離心的轉速為5000g。
10.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3’)所述換液后的培養液為含有丙酮酸鈉的DMEM。
11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸鈉的濃度為4-8mM。
12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸鈉的濃度為5mM。
13.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，還包括計算所述腺相關病毒的滴度的步驟。
14.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述腺相關病毒滴度為(1-3)×1012TU/mL。
15.根據權利要求13所述的方法，其特征在于，所述腺相關病毒滴度為1×1012TU/mL。
16.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述腺相關病毒的感染濃度為細胞個數：病毒個數＝1:(400-600)。
17.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述腺相關病毒的感染濃度為細胞個數：病毒個數＝1:500。
18.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述神經元細胞為TH-cre轉基因小鼠骨髓內TH神經元細胞。
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