[發明專利]一種甲基營養型芽孢桿菌B18及其顆粒劑和應用

有效

• 申請號: 201711193839.1
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107760631B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 李姝江;崔玉婷;朱天輝;方馨玫;黎肇家;譙天敏;韓珊
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明公開了一種甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)B18及其顆粒劑和應用，該菌株已經于2017年9月18日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.14641。本發明還提供了甲基營養型芽孢桿菌B18顆粒劑，按重量百分含量包括：種子發酵液10％，固態發酵制劑15％，粘合劑15％，載體補足100％。本發明提供的甲基營養型芽孢桿菌B18及其顆粒劑對杜仲根腐病有特效，適宜于商品化生產，對環境親和性好，具有可持續、成本低的特點。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種甲基營養型芽孢桿菌B18菌株及其顆粒劑和在杜仲根腐病防治上的應用。

背景技術

杜仲，屬于杜仲科杜仲屬多年生落葉喬木，該科僅有1屬1種植物，是我國僅存的第三紀孑遺植物，屬國家二級保護名貴經濟樹種，還是我國特產樹種和著名藥材。杜仲有近千年的栽培歷史，實用型極強，在我國亞熱帶至溫帶的27個省均可種植，主要產于四川、云南、貴州、湖南、湖北、陜西、江蘇及浙江等省。杜仲被列為貴州地道中藥材GAP基地示范品種之一。它全身都是寶，用途廣泛，具有極大的藥用價值和經濟價值。杜仲被成為神奇之樹，其葉、雄花、果實和樹皮都含有許多人體不可缺少的活性物質，這些活性物質具有十分獨特的醫療保健功能，在促進體內膠原蛋白的合成、抗衰老、降血壓、抗疲勞、人體免疫調節、預防細胞癌變、降低血脂和膽固醇、治療心腦血管疾病，補肝腎等方面有獨特的功效，并且無毒副作用樹皮可以入藥，有滋補肝腎、強健筋骨、治療腰膝痛和高血壓等功效。樹皮、葉和果實還能提取杜仲膠(又名硬橡膠)，可代替橡膠用，是世界上十分珍貴的優質天然橡膠資源。還可以加工成各種優質飲料。另外，杜仲的木材紋理直行、結構細致，不翹不裂，是制造家具和其他木制品的優質材料。目前國內外市場需求量大，皮、葉價格逐漸上漲。

在杜仲苗期，根腐病發生尤為嚴重。初期支根和須根感病，逐漸向主根擴展。主根早期不表現癥狀，后隨著腐爛程度的加劇，吸收水分和養分的功能逐漸減弱，地上部分新葉首先發黃，地下部分發黑腐爛。病情嚴重時，整株葉片發黃、枯萎，根皮變褐，并與髓部分離，最后全株死亡。目前，在該病防治手段上主要以土壤消毒、營林措施、化學防治為主，但化學農藥對環境污染較大，且易殘留；對人畜安全、環境友好的生物防治并未涉及。這項技術是利用生態平衡原理，引進有益微生物或其產物，達到穩定、長期、有效控制病害的目的。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術在防治杜仲根腐病中的缺陷，提供了甲基營養型芽孢桿菌B18菌株及其顆粒劑的制作方法和在杜仲根腐病中的應用。

本發明具體通過以下技術方案實現：

本發明的甲基營養型芽孢桿菌(Bacillus methylotrophicus)B18菌株于2016年11月20日采用平板稀釋涂布法分離于四川大邑仰天窩藥場健康杜仲樹皮，已經于2017年9月18日保藏于中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No.14641。

本發明甲基營養型芽孢桿菌B18在NA平板培養基上培養了2d的單菌落呈白色，圓形，邊緣不整齊，表面干燥，有褶皺，無粘性，不透明。

本發明甲基營養型芽孢桿菌B18的16S rDNA的序列為：SEQ ID NO:1。

本發明以甲基營養型芽孢桿菌B18為活性成分的顆粒劑，按重量百分比包括以下組分：種子發酵液10％，固態發酵制劑15％，粘合劑0.3％羧甲基纖維素鈉15％，載體草木灰補足100％，所述的種子發酵液和固態發酵制劑均是通過以甲基營養型芽孢桿菌B18為菌種，經種子培養、發酵培養得到。

本發明所述的以甲基營養型芽孢桿菌B18為活性成分的顆粒劑中含活芽孢數不低于1×10⁸cfu/g。

本發明還提供了以甲基營養型芽孢桿菌B18為活性成分的顆粒劑的制備方法，具體包括以下步驟：