[發明專利]一種可同時標記細胞核的封片劑的制備方法

在審

• 申請號: 201711192562.0
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107907399A
• 公開（公告）日: 2018-04-13
• 發明（設計）人: 楊明理;何波
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N21/64
• 代理公司: 遵義市遵科專利事務所52102
• 代理人: 劉創先

技術領域

本發明涉及生物醫學，具體為一種可同時標記細胞核的封片劑的制備方法。

背景技術

在生物醫學實驗中，經常需要用熒光染料對細胞和組織中的特異成分進行染色，然后在熒光顯微鏡下觀察。并且，幾乎所有樣本的熒光標記都會對細胞核進行染色。目前普遍采用的實驗方法是依次對細胞中的特異成分和細胞核進行標記，用封片劑封片后，在熒光顯微鏡下觀察。每一種熒光標記后都需要多次洗滌，步驟繁瑣，也耗費不少時間。由于熒光容易淬滅，熒光標記操作時間越短越好，因此很有必要找到一種縮短熒光染色的方法。

發明內容

本發明的目的在于克服上述背景技術困難，提供一種可同時標記細胞核的封片劑的制備方法。

為達到上述目的，采用的技術方案為：

一種可同時標記細胞核的封片劑的制備方法，包含如下步驟：

1). 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去離子水，備用；

2). 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去離子水，備用；

3). 配制Tris-磷酸鹽緩沖液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O調節pH至7.6，備用；

4). 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去離子水，充分混勻，高壓滅菌，備用；

5). 封片劑配制：

a. 取上述配制好的Tris-磷酸鹽緩沖液5ml和75ml去離子水充分混合；

b. 向步驟a制備的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分攪拌混合，用保鮮膜密封，放置60℃水浴過夜；

c. 取三氯叔丁醇100mg與50%甘油30ml充分攪拌混合；

d. 取DAPI 0.1mg加入步驟c的溶液中，充分混勻；

e. 將步驟d溶液緩慢加入步驟b溶液中，一邊加一邊混勻；

f. 混合后的液體用保鮮膜密封，并用錫箔紙包裹避光，4℃保存，即成。

上述步驟5）b中，聚乙烯醇的醇解度為87%-90%，分子量為30,000-70,000。

采用上述方案的有益效果為：本發明制備的可同時標記細胞核的封片劑，省去了染色和洗滌的步驟，能有效簡化實驗流程，節約時間成本，提高工作效率。該封片劑可用于冰凍切片、石蠟切片、細胞爬片和血液涂片等樣本的細胞核標記及封片。該封片劑不僅可以用于熒光顯微鏡的觀察，也可用于激光共聚焦顯微鏡的觀察。

具體實施方式

下面結合實施例進一步介紹本發明，但本發明不僅限于下述實施例，可以預見本領域技術人員在結合現有技術的情況下，實施情況可能產生種種變化。

一種可同時標記細胞核的封片劑的制備方法，包含如下步驟：

1). 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去離子水，備用；

2). 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去離子水，備用；

3). 配制Tris-磷酸鹽緩沖液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O調節pH至7.6，備用；

4). 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去離子水，充分混勻，高壓滅菌，備用；

5). 封片劑配制：

a. 取上述配制好的Tris-磷酸鹽緩沖液5ml和75ml去離子水充分混合；

b. 向步驟a制備的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分攪拌混合，用保鮮膜密封，放置60℃水浴過夜；

c. 取三氯叔丁醇100mg與50%甘油30ml充分攪拌混合；

d. 取DAPI 0.1mg加入步驟c的溶液中，充分混勻；

e. 將步驟d溶液緩慢加入步驟b溶液中，一邊加一邊混勻；