[發明專利]微小RNA及其在制備抗腫瘤藥物中的應用

有效

• 申請號: 201711189410.5
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107699565B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 汪維鵬;孟凡義;邱雅靜;孔潔紅;陳喜華
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;A61K31/7115;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

本發明涉及生物制藥技術領域，尤其涉及微小RNA及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發明提供的RNA分子為miR?34a序列5’端第10位～第22位中的任一堿基突變為n，所述n為A、C、G或U；采用該RNA分子及其互補鏈能夠抑制腫瘤細胞中PD?L1、B7?H3、B7?H4等蛋白水平，抑制腫瘤細胞生長和/或增殖，從而起到抗腫瘤的作用。并且，研究表明，本發明提供的微小RNA在抗腫瘤的同時，對血清中細胞因子的分泌均沒有顯著影響。

技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，尤其涉及微小RNA及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

我國惡性腫瘤發病率和死亡率逐年上升，越來越受到醫學界的重視，亦然成為基礎研究和臨床研究的重大課題。雖然腫瘤治療取得了一定的進展，但離生存期的根本提高對生活質量的要求仍有一定的距離，探求更為安全有效的輔助治療仍需更多努力。目前，腫瘤免疫治療已成為繼手術、化療和放療后的一種有效療法而被廣泛用于臨床，尤其是基于免疫卡控點的阻斷療法。有效的抗腫瘤免疫治療依賴于細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)的有效活化，而T細胞的有效活化和功能介導依賴于抗原遞呈細胞和T細胞表面的配體/受體對提供的協同刺激信號。其中，B7-CD28是迄今為止公認的最基本的協同刺激信號，包括B7-1、B7-2、B7h、PD-L1(B7-H1)、B7-H2、B7-H3、B7-H4等配體與CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1、BTLA等受體提供的促進T細胞生長、分化和產生細胞因子的正性信號，以及限制、終止和/或減弱T細胞應答的負性信號。

PD-L1、B7-H3和B7-H4是近年發現的B7家族協同刺激分子的重要成員，均被發現在多種腫瘤組織中異常高表達，包括腸癌、胃癌、食管癌、肺癌、尿路移形細胞癌、腎癌和前列腺癌等；且其高表達與患者預后差顯著相關。大量研究亦已證實，通過抑制PD-L1、B7-H3或B7-H4表達可以獲得很好的抗腫瘤效果；目前，已經上市的PD-L1單克隆抗體藥物有羅氏的Atezolizumab，用于治療尿路上皮癌(膀胱癌)或靶向治療和化療失敗的非小細胞肺癌患者，以及阿斯利康公司的Durvalumab用于治療局部晚期或轉移性尿路上皮癌患者。我們前期研究發現，PD-L1、B7-H3或B7-H4的表達均可被內源性微小RNA抑制。

微小RNA(microRNA)是近年來發現于真核細胞中的一類長約22個核苷酸的內源性非編碼小分子RNA，其5’-端第2-9個堿基(seed region)可通過與靶基因的3′-UTR結合，在翻譯水平抑制蛋白合成，從而在基因表達中發揮重要的調節作用。迄今為止，人類基因組中已明確的微小RNA約有2588個(miRBase)，調控著至少30％基因的表達，而每一個微小RNA可能參與調控100～200個靶基因的翻譯。微小RNA由于其廣泛的調控作用參與了細胞的生長、分化、增殖和凋亡等生命過程，影響著幾乎所有的信號通路，并參與各種生理病理過程，特別在腫瘤的發生和發展中發揮了極為重要的作用。

大量研究結果顯示微小RNA在腫瘤中呈現異常表達，其中有的微小RNA表達升高而有的降低，分別通過抑制抑癌基因表達或上調癌基因表達，發揮著促癌或抑癌的作用。2002年，Clain等發現兩個微小RNA基因miR-15和miR-16在慢性淋巴細胞白血病患者中常發生缺失，首次揭示了微小RNA與腫瘤的密切關系。之后，越來越多的微小RNA被發現在腫瘤中異常表達，如低表達的miR-34a、miR-143、miR-145和高表達的miR-21、miR-27a、miR-155等。業已證實，通過在腫瘤細胞中轉入低表達微小RNA的模擬物(mimic和agomir等)，或者轉入高表達微小RNA的抑制劑(inhibitor和antagomir等)，可以有效抑制腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移，從而發揮抗腫瘤效果。