[發(fā)明專利]基于肽核酸探針的Wnt信號通路中Pygo2基因R356P突變的檢測試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711188148.2
• 申請日: 2015-06-24
• 公開（公告）號: CN107746883B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐景峰;周策凡;陳興珍;張毅;代俊;周夢舟
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 朱盛華

本發(fā)明公開了一種基于肽核酸探針的Wnt信號通路中Pygo2基因R356P突變的檢測試劑、PCR檢測方法及應(yīng)用，檢測試劑包括引物、肽核酸熒光探針及野生型互補(bǔ)的肽核酸序列，正向引物如序列表中SEQ ID NO.1、NO.3、NO.5、NO.7；反向引物如序列表中SEQ ID NO.2、NO.4、NO.6、NO.8；肽核酸熒光探針如序列表中SEQ ID NO.9、NO.10、NO.11、NO.12；野生型互補(bǔ)肽核酸序列如序列表中SEQ ID NO.13、NO.14、NO.15、NO.16。本發(fā)明從轉(zhuǎn)錄水平能快速發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路中Pygo2基因的變情況，為抗癌藥物篩選，新靶向藥物探討、基礎(chǔ)科學(xué)研究提供工具。

本發(fā)明是《基于肽核酸探針的Wnt信號通路中Pygo2基因突變的檢測試劑、PCR檢測方法及應(yīng)用》(專利申請?zhí)?015103553148，申請日20150624)的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)生物核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于肽核酸探針的Wnt信號通路中Pygo2基因突變的檢測試劑、PCR檢測方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

Wnt信號通路廣泛存在于無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中，是一類在物種進(jìn)化過程中高度保守的信號通路。Wnt信號在動(dòng)物胚胎的早期發(fā)育、器官形成、組織再生和其它生理過程中，具有至關(guān)重要的作用。如果這條信號通路中的關(guān)鍵蛋白發(fā)生突變或者異常表達(dá)，導(dǎo)致信號異常活化，就可能誘導(dǎo)癌癥的發(fā)生。Wnt信號通路包括經(jīng)典的Wnt信號通路與非經(jīng)典的Wnt信號通路，在經(jīng)典通路即Wnt-β-catenin信號通路中，Wnt因子通過激活細(xì)胞膜上的Frizzle/LRP5/6協(xié)同受體后抑制細(xì)胞內(nèi)游離β-catenin蛋白的磷酸化和降解，細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin蛋白水平升高后將發(fā)生β-catenin蛋白的核移位，導(dǎo)致細(xì)胞核中β-catenin蛋白升高，胞核中β-catenin蛋白能夠聯(lián)合Pygo2、Bcl-9以及FoxM1蛋白共同與TCF/LEF-1轉(zhuǎn)錄因子家族形成復(fù)合體并激活Wnt信號通路下游靶基因的轉(zhuǎn)錄激活。

Pygo2蛋白是Wnt信號通路中β-catenin下游重要成員之一，目前越來越多的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在很多腫瘤中Pygo2蛋白均呈現(xiàn)高表達(dá)。

目前研究核心信號通路的核心分子調(diào)控機(jī)制，以及某些重要成員在細(xì)胞中的表達(dá)水平，已經(jīng)成為治療腫瘤的一種關(guān)鍵手段，雖然近年來Wnt信號通路在癌癥中的研究，以及Pygo2蛋白作為Wnt信號通路重要成員其表達(dá)水平的研究，已經(jīng)成為研究開發(fā)腫瘤藥物急需解決的重要問題，但是同時(shí)其在很多腫瘤細(xì)胞中基因的突變也越來越多，尤其是在Pygo2蛋白NHD端及PHD端發(fā)生的突變，對Pygo2蛋白發(fā)揮功能啟動(dòng)非常重要的作用，例如在膀胱癌細(xì)胞中檢測出NHD端R46S突變，胰腺癌細(xì)胞中檢測出P98H突變，肺腺癌細(xì)胞中檢測出的PHD端R334Q突變以及急性骨髓性白血病中檢測出的R356P突變。

肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是一類以多肽骨架取代糖磷酸主鏈的DNA類似物。它是在第一代、第二代反義試劑的基礎(chǔ)上，通過計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)構(gòu)建并最終人工合成的第三代反義試劑，是一種全新的DNA類似物，即以中性的肽鏈酰胺2-氨基乙基甘氨酸鍵取代了DNA中的戊糖磷酸二酯鍵骨架，其余的與DNA相同，PNA可以通過Watson-Crick堿基配對的形式識別并結(jié)合DNA或RNA序列，形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。由于PNA不帶負(fù)電荷，與DNA和RNA之間不存在靜電斥力，因而結(jié)合的穩(wěn)定性和特異性都大為提高；不同于DNA或DNA、RNA間的雜交，PNA與DNA或RNA的雜交幾乎不受雜交體系鹽濃度影響，與DNA或RNA分子的雜交能力遠(yuǎn)優(yōu)于DNA/DNA或DNA/RNA，表現(xiàn)在很高的雜交穩(wěn)定性、優(yōu)良的特異序列識別能力、不被核酸酶和蛋白酶水解。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)狀，旨在提供一種能確定Wnt信號通路中核心的信號分子Pygo2基因突變情況，能解釋核心分子Pygo2在腫瘤細(xì)胞中變化，結(jié)果重復(fù)性，敏感性好的基于肽核酸探針的Wnt信號通路中Pygo2基因R356P突變的檢測試劑。