[發(fā)明專利]葎草花粉過敏性哮喘免疫治療小鼠模型的建立方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711187985.3 | 申請日： | 2017-11-24 |
| 公開（公告）號： | CN107669743B | 公開（公告）日： | 2020-08-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 尹佳;孔瑞;席廣鵬 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院 |
| 主分類號： | C07K14/415 | 分類號： | C07K14/415;C07K1/34;A61K39/36;A61P11/06;A61P37/08 |
| 代理公司： | 北京智為時(shí)代知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498 | 代理人： | 王加嶺;楊靜 |
| 地址： | 100032 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 花粉 過敏性 哮喘 免疫 治療 小鼠 模型 建立 方法 | ||
1.一種葎草花粉過敏性哮喘免疫治療小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括步驟：
第一步:分別于第1天、第8天和第15天對BALB/c小鼠頸后皮下各注射25μl、1μg/μl的葎草花粉變應(yīng)原粗浸液對小鼠致敏；
第二步：第22-24天，霧化吸入1％的葎草花粉變應(yīng)原粗浸液激發(fā)，連續(xù)3天，每天30min；
第三步：第25天開始，頸后皮下注射300μg的葎草花粉變應(yīng)原粗浸液脫敏，隔天一次，共8次；
第四步：第43-49天，霧化吸入1％的葎草花粉變應(yīng)原粗浸液再次激發(fā)，連續(xù)7天，每天30min；造模成功；
其中所述的葎草花粉變應(yīng)原粗浸液是凍干的葎草花粉變應(yīng)原用PBS溶解，調(diào)整濃度為1μg/μl，分別用于第一步致敏、第二步激發(fā)、第三步脫敏以及第四步再次激發(fā)；第三步脫敏過程中300μg葎草花粉變應(yīng)原粗浸液為1μg/μl的300μl，使用時(shí)入V:W＝5:2的氫氧化鋁佐劑120μg；
所述葎草花粉變應(yīng)原的提取方法，具體步驟為：
稱重：稱取40g葎草花粉；
脫脂：加入W:V＝1：20的800ml丙酮于4℃攪拌24h；
風(fēng)干：棄丙酮，花粉置于通風(fēng)櫥內(nèi)等待殘余丙酮揮發(fā)；
提取：加入800ml去離子水，4℃攪拌24h；
離心：10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心15min；
過濾：0.2μm濾膜負(fù)壓過濾；
透析：濾液裝入3.5kd透析袋，加入去離子水16L按V:V＝1:20透析，4℃攪拌24h，期間換水6次；
分裝：透析后的提取液分裝于10ml西林瓶中，每瓶2ml，置于-80℃冰箱過夜；
凍干：將西林瓶從-80℃冰箱取出置于凍干機(jī)中凍干。
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