[發明專利]一種粗肋草組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201711187732.6
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107711513B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 尤毅;景維杰;鐘榮輝;劉金梅;章金輝;陳香羅
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院環境園藝研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 符繼超

1.一種粗肋草組織培養快速繁殖方法,其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)預處理和外植體取材、消毒：選取性狀優良、生長健壯的粗肋草栽培株，先將母株放置于通風良好的場所，定期噴施殺菌藥7天/次，噴施2次后可取材，從基部第二個芽上切下莖；用手術刀將葉片葉柄從基部去除露出芽點后，用75％乙醇溶液震蕩消毒50秒后用無菌水沖洗，而后在超凈工作臺上用有效氯含量1.5％的漂白水溶液+TWEEN-20消毒18-22分鐘；消毒期間頻繁震蕩容器使消毒劑充分滲透，然后用無菌水沖洗3-5次，每次2分鐘，后用無菌濾紙將消毒莖殘余水分吸干，用消毒過的鑷子和手術刀仔細將芽點切下，每個芽點取材大小5毫米，接種到誘導培養基；

(2)叢生芽的誘導：外植體接種入誘導培養基后放置于培養室，先暗培養7天后轉光照培養，光周期12小時/天，光照度1200-1500lx，室內溫度控制25±2℃，7天后可見白色芽點轉綠，30天后芽體伸長，35天后可切下芽體轉入增殖培養基擴繁；

(3)叢生側芽增殖：將誘導獲得的無菌芽體切掉葉片，保留從基部向上1.5厘米的莖部，轉接到增殖培養基進行增殖培養；培養條件光周期12小時/天，光照度1200-1500lx，室內溫度控制25±2℃，培養45-50天后，即可獲得增殖系數達2.5-3.5的叢生芽叢；將叢生芽切割為單獨芽體或叢芽團繼續轉接到同樣的增殖培養基中多次繼代培養，轉接周期40-50天一代，培養溫度和光強、光照度同增殖培養，以獲得所需要的量產數量；

(4)無根芽體復壯培養：繼代增殖數達到預期數量后，將叢生芽分單株苗分切，轉接如復壯培養基，培養溫度，25±2℃，光照周期轉變為16小時/天，光照度同增殖培養，培養35天后轉接；

(5)生根培養：復壯培養后，叢生芽恢復健壯，個體長大，將高度達到2.5厘米的苗轉接到生根培養基促使發根，高度不夠的弱小芽體重復復壯一次后再生根培養，生根培養環境光照和溫度控制同復壯培養期間，培養25天可見發根后即可開始自然馴化；

(6)自然馴化：生根培養25-30天后，已見不定根長出和后續的根原基萌發，瓶苗轉到溫室設施內接受自然光和溫度的馴化，馴化期間溫度15-28℃，光照3000-5000lx，馴化20-25天后可生根苗出瓶移栽；

(7)組培苗移栽：將馴化好的生根組培苗從瓶中取出，洗凈根系所粘的培養基，高錳酸鉀溶液浸泡消毒1分鐘后取出，用72穴篩盤、基質泥炭土種植，種植后設施溫室內濕度在70～80％，溫度保持在15℃以上至室溫范圍內，高于30℃必須用風機、水簾降溫；

所述誘導培養基成分中含有DCR基本培養基大量鹽分+MS配方微量元素+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)2-3mg/L+NAA(萘乙酸)0.10mg/L+；培養基含糖20g/L，瓊脂0.56％，PH值5.5-5.8；

所述增殖培養基成分中含有1/3MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)3-5mg/L+NAA(萘乙酸)0.15-0.2mg/L+GA3(赤霉酸)0.5mg/L+吡效隆(TDZ)0.5-1mg/L，培養基含糖20g/L，瓊脂0.56％；

復壯培養基成分中含有1/4MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)0.6mg/L+NAA(萘乙酸)0.6mg/L+1g/L活性炭，培養基含糖20g/L，瓊脂0.56％；

生根培養基成分中含有1/5MS+NAA(萘乙酸)0.5～1.0mg/L+白砂糖25g/L+3.0～5.0g/L活性炭。

2.如權利要求1所述的粗肋草組織培養快速繁殖方法，其特征在于，步驟(1)中是用75％乙醇溶液震蕩消毒50秒后用無菌水沖洗，而后在超凈工作臺上用有效氯含量1.5％的漂白水溶液+3滴/升漂白水溶液的TWEEN-20消毒18-22分鐘。

3.如權利要求1所述的粗肋草組織培養快速繁殖方法，其特征在于：步驟(7)用于浸泡小苗根部的高錳酸鉀溶液為0.1％的高錳酸鉀溶液。