[發(fā)明專利]一種粗肋草組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711187732.6
• 申請(qǐng)日: 2017-11-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107711513B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尤毅;景維杰;鐘榮輝;劉金梅;章金輝;陳香羅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 符繼超

1.一種粗肋草組織培養(yǎng)快速繁殖方法,其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)預(yù)處理和外植體取材、消毒：選取性狀優(yōu)良、生長(zhǎng)健壯的粗肋草栽培株，先將母株放置于通風(fēng)良好的場(chǎng)所，定期噴施殺菌藥7天/次，噴施2次后可取材，從基部第二個(gè)芽上切下莖；用手術(shù)刀將葉片葉柄從基部去除露出芽點(diǎn)后，用75％乙醇溶液震蕩消毒50秒后用無(wú)菌水沖洗，而后在超凈工作臺(tái)上用有效氯含量1.5％的漂白水溶液+TWEEN-20消毒18-22分鐘；消毒期間頻繁震蕩容器使消毒劑充分滲透，然后用無(wú)菌水沖洗3-5次，每次2分鐘，后用無(wú)菌濾紙將消毒莖殘余水分吸干，用消毒過(guò)的鑷子和手術(shù)刀仔細(xì)將芽點(diǎn)切下，每個(gè)芽點(diǎn)取材大小5毫米，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

(2)叢生芽的誘導(dǎo)：外植體接種入誘導(dǎo)培養(yǎng)基后放置于培養(yǎng)室，先暗培養(yǎng)7天后轉(zhuǎn)光照培養(yǎng)，光周期12小時(shí)/天，光照度1200-1500lx，室內(nèi)溫度控制25±2℃，7天后可見(jiàn)白色芽點(diǎn)轉(zhuǎn)綠，30天后芽體伸長(zhǎng)，35天后可切下芽體轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基擴(kuò)繁；

(3)叢生側(cè)芽增殖：將誘導(dǎo)獲得的無(wú)菌芽體切掉葉片，保留從基部向上1.5厘米的莖部，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)條件光周期12小時(shí)/天，光照度1200-1500lx，室內(nèi)溫度控制25±2℃，培養(yǎng)45-50天后，即可獲得增殖系數(shù)達(dá)2.5-3.5的叢生芽叢；將叢生芽切割為單獨(dú)芽體或叢芽團(tuán)繼續(xù)轉(zhuǎn)接到同樣的增殖培養(yǎng)基中多次繼代培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接周期40-50天一代，培養(yǎng)溫度和光強(qiáng)、光照度同增殖培養(yǎng)，以獲得所需要的量產(chǎn)數(shù)量；

(4)無(wú)根芽體復(fù)壯培養(yǎng)：繼代增殖數(shù)達(dá)到預(yù)期數(shù)量后，將叢生芽分單株苗分切，轉(zhuǎn)接如復(fù)壯培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度，25±2℃，光照周期轉(zhuǎn)變?yōu)?6小時(shí)/天，光照度同增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)35天后轉(zhuǎn)接；

(5)生根培養(yǎng)：復(fù)壯培養(yǎng)后，叢生芽恢復(fù)健壯，個(gè)體長(zhǎng)大，將高度達(dá)到2.5厘米的苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基促使發(fā)根，高度不夠的弱小芽體重復(fù)復(fù)壯一次后再生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)環(huán)境光照和溫度控制同復(fù)壯培養(yǎng)期間，培養(yǎng)25天可見(jiàn)發(fā)根后即可開(kāi)始自然馴化；

(6)自然馴化：生根培養(yǎng)25-30天后，已見(jiàn)不定根長(zhǎng)出和后續(xù)的根原基萌發(fā)，瓶苗轉(zhuǎn)到溫室設(shè)施內(nèi)接受自然光和溫度的馴化，馴化期間溫度15-28℃，光照3000-5000lx，馴化20-25天后可生根苗出瓶移栽；

(7)組培苗移栽：將馴化好的生根組培苗從瓶中取出，洗凈根系所粘的培養(yǎng)基，高錳酸鉀溶液浸泡消毒1分鐘后取出，用72穴篩盤(pán)、基質(zhì)泥炭土種植，種植后設(shè)施溫室內(nèi)濕度在70～80％，溫度保持在15℃以上至室溫范圍內(nèi)，高于30℃必須用風(fēng)機(jī)、水簾降溫；

所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分中含有DCR基本培養(yǎng)基大量鹽分+MS配方微量元素+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)2-3mg/L+NAA(萘乙酸)0.10mg/L+；培養(yǎng)基含糖20g/L，瓊脂0.56％，PH值5.5-5.8；

所述增殖培養(yǎng)基成分中含有1/3MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)3-5mg/L+NAA(萘乙酸)0.15-0.2mg/L+GA3(赤霉酸)0.5mg/L+吡效隆(TDZ)0.5-1mg/L，培養(yǎng)基含糖20g/L，瓊脂0.56％；

復(fù)壯培養(yǎng)基成分中含有1/4MS+6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)0.6mg/L+NAA(萘乙酸)0.6mg/L+1g/L活性炭，培養(yǎng)基含糖20g/L，瓊脂0.56％；

生根培養(yǎng)基成分中含有1/5MS+NAA(萘乙酸)0.5～1.0mg/L+白砂糖25g/L+3.0～5.0g/L活性炭。

2.如權(quán)利要求1所述的粗肋草組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟(1)中是用75％乙醇溶液震蕩消毒50秒后用無(wú)菌水沖洗，而后在超凈工作臺(tái)上用有效氯含量1.5％的漂白水溶液+3滴/升漂白水溶液的TWEEN-20消毒18-22分鐘。

3.如權(quán)利要求1所述的粗肋草組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：步驟(7)用于浸泡小苗根部的高錳酸鉀溶液為0.1％的高錳酸鉀溶液。