[發明專利]獼猴桃種子的無菌采集方法

有效

• 申請號: 201711187022.3
• 申請日: 2017-11-24
• 公開（公告）號: CN107750664B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 張乃群;楊迪;趙新仕;周業皓;孫菁婕;鄒婷婷
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: A01D91/00
• 分類號: A01D91/00;A01C1/00
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 李靜雅

本發明涉及一種獼猴桃種子的無菌采集方法，所述方法包括選取健康、成熟的獼猴桃果實，對器具進行滅菌，然后在超凈工作臺上剝皮處理后置于滅過菌的蒸餾水中攪拌，然后沖洗飽滿健康的種子。本發明操作簡單，利用本發明所采集的獼猴桃種子高效且完全無菌，去除了實驗過程中消毒殺菌的部分，減小了實驗量，對環境無害，對要求無菌操作的獼猴桃種子的相關實驗有很大的價值。

技術領域

本發明屬于果樹育種技術領域，具體涉及一種實驗室用獼猴桃種子的無菌采集方法。

背景技術

獼猴桃是漿果類果樹的一種，其種子鑲嵌在果肉中且十分小，取種工作比較困難。目前，采集獼猴桃種子使用較多的方法是先將獼猴桃存放，待其完全成熟軟化后，把獼猴桃內部的果肉和種子一齊揉擠出來，裝進紗布袋子里反復揉搓，待果汁被擠盡之后，再用水反復淘洗，淘洗過程可清除漂浮的雜質和空種粒。洗干凈的種子，最后還需攤開晾曬。雖然這種方法可獲得大量的種子，但缺點也很明顯，等待軟化、分攤晾曬均需要耗費大量時間，反復淘洗又會對水資源造成浪費，反復揉搓也需耗費人力物力，整個過程繁瑣，增加了育種時間，提高了生產成本。

近些年，報道了一些發明人對獼猴桃種子的采集方法進行了改進（例如中國專利申請201210230778.2，公開了一種獼猴桃種子的采集方法，包括放置成熟、切片、平鋪粘貼、干燥處理、收集、后處理等步驟），或設計出了獼猴桃種子采集機器（例如中國專利申請201611198460.5，公開了一種便于取出獼猴桃種子的設備），在縮短取種時間、降低資源浪費方面做出了很大貢獻，但是，這些方法或設備采集的獼猴桃種子均是裸露在空氣中，使本來無菌的種子帶上了細菌。果樹育種領域技術人員已知的是，胚乳培養是倍性育種的常用手段，獼猴桃屬于被子植物且是雌雄異株，雙受精作用致使其種子的胚乳屬于三倍體組織，通過對其胚乳的離體培養，對改善獼猴桃的食用品質、選育無籽獼猴桃等方面均有重要的意義。然而，實驗室中，胚乳的離體培養需要嚴格的無菌種子，而現有的方法所取的種子都是帶菌的，做實驗前還需要使用升汞進行消毒殺菌，加重了實驗量，消耗的升汞對環境有一定的危害，整個操作也比較復雜。

鑒于此，研究一種適用于實驗室的無菌采集獼猴桃種子的方法是非常有必要的。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的旨在探究一種耗材少、節水、對環境無害且高效的實驗室無菌采集獼猴桃種子的方法。獼猴桃的種子是嵌入在果肉內部的，有果肉、果皮兩個防護罩，與外界有菌環境完全隔絕，其是完全無菌的。本發明利用了這一點，設計的實驗過程確保在采集種子過程中種子不會接觸到有菌環境，因此，取出的種子是完全無菌的，從而完成本發明。

因此，本發明提供了一種獼猴桃種子的無菌采集方法，所述方法包括以下步驟：

（1）取材，選取健康、成熟的獼猴桃果實；

（2）滅菌，將手術刀、鑷子、濾紙用報紙包裹起來，將裝有蒸餾水的容器用牛皮紙密封瓶口，向帶蓋的實驗瓶內放入磁力攪拌子，再將上述物品置于高壓滅菌鍋內滅菌，然后放入超凈工作臺，紫外燈照射40min；

（3）采集，將獼猴桃果實置于滅菌的濾紙上，用鑷子和手術刀剝皮，將剝完皮的果肉置于另一張滅菌的濾紙上，用鑷子擠壓，然后投入實驗瓶，倒入滅過菌的蒸餾水至實驗瓶體積的三分之二，擰緊瓶蓋，置于磁力攪拌器上攪拌2-3min，靜置，取沉在瓶底的飽滿健康種子，再用無菌水沖洗2-3次，獲得干凈的獼猴桃種子。

在優選的實施方式中，所述裝有蒸餾水的容器可以為三角瓶，所述帶蓋的實驗瓶為果醬瓶。

在具體實施方式中，步驟（2）中在高壓滅菌內滅菌的條件為在121℃下，在0.1MPa壓強下滅菌20min。

在優選的實施方式中，在步驟（3）中，使用鑷子和手術刀之前，在酒精燈上進行灼燒。優選地，磁力攪拌器的轉速為1500-2400 r/min。