[發明專利]一種穩定的對硝基苯磷酸溶液及其制備方法

有效

• 申請號: 201711184125.4
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN108004296B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 崔海林;黃小全;李冰;曾曉君;黃清媚
• 申請（專利權）人: 中山市創藝生化工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/42
• 分類號: C12Q1/42
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 李旭亮

本發明公開了一種穩定的對硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase?HCl緩沖液，咪唑，對硝基苯磷酸二鈉，疊氮化鈉。其配制方法是：1)將Trisbase和咪唑依次溶于去離子水中；2)用鹽酸溶液調節以上溶液pH至8.4后加入疊氮化鈉，攪拌使充分溶解；3)加入對硝基苯磷酸二鈉，充分混勻后定容；4)將配制好的存儲液轉入棕色試劑瓶，于2?8℃條件下避光保存。本發明配制的對硝基苯磷酸溶液具有較好穩定性，該存儲液用于堿性磷酸酶測定試劑盒中精密度、相關性良好，同時產品具有較好穩定性。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及一種穩定的對硝基苯磷酸溶液及其制備方法。

背景技術

堿性磷酸酶(ALP或AKP)是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉換成5’-OH末端。堿性磷酸酶主要用于阻塞性黃疸、原發性肝癌、繼發性肝癌、膽汁淤積性肝炎等的檢查。患這些疾病時，肝細胞過度制造ALP，經淋巴道和肝竇進入血液，同時由于肝內膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清堿性磷酸酶明顯升高。但由于骨組織中此酶亦很活躍。因此，孕婦、骨折愈合期、骨軟化癥。佝僂病、骨細胞癌、骨質疏松、肝膿腫、肝結核、肝硬變、白血病、甲狀腺機能亢進時，血清堿性磷酸酶亦可升高。

目前堿性磷酸酶的檢測主要是基于PNPP-AMP法，即在堿性條件下，堿性磷酸酶水解底物對硝基苯磷酸二鈉(PNPP)，水解產物對硝基苯酚形成速率和堿性磷酸酶的活性成正比。然而，PNPP是一種不穩定的化合物，在光照或溶液狀態下極易分解，給設計具有適用價值的試劑盒帶來困難。專利US3425912A提供了一種使用有機胺與對硝基苯磷酸反應制備穩定的干態PNPP鹽的方法。專利US4132598提到使用酚類或者含咪唑結構的化合物可以作為PNPP在溶液中的穩定劑，為得到穩定的對硝基苯磷酸溶液，要先將底物對硝基苯磷酸和穩定劑在干態的條件下混合后再溶于去離子水中，然后調節溶液pH至8.6左右，操作步驟比較復雜。

發明內容

本發明的目的在于公開一種穩定的對硝基苯磷酸溶液及其制備方法。

本發明所采取的技術方案是：一種穩定的對硝基苯磷酸溶液，溶液含有Trisbase-HCl緩沖液，咪唑，對硝基苯磷酸二鈉，疊氮化鈉。

優選的，溶液中Trisbase-HCl緩沖液濃度為30-50mM；按質量體積比計，咪唑濃度為0.4-0.6％，對硝基苯磷酸二鈉濃度為1.5-5.0％，疊氮化鈉濃度為0.1-0.2％。

優選的，Trisbase-HCl緩沖液pH為8.4。

一種堿性磷酸酶試劑盒，試劑盒由反應緩沖液和底物存儲液兩部分組成。

優選的，反應緩沖液由AMP-HCl緩沖液，硫酸鎂，硫酸鋅，HEDTA組成。

硝基苯磷酸溶液的配制方法，包含以下步驟：

1)將Trisbase和咪唑依次溶于去離子水中；

2)用鹽酸溶液調節以上溶液pH至8.4后加入疊氮化鈉，攪拌使充分溶解；

3)加入對硝基苯磷酸二鈉，充分混勻后定容；

4)將配制好的存儲液轉入棕色試劑瓶，于2-8℃條件下避光保存。

本發明的有益效果是：本發明無需將底物與其保護劑在干態下預混合，只需依序將各物料溶于去離子水即可，減少了實驗設備的使用，簡化了生產工藝。堿性磷酸酶底物存儲液具有較好穩定性，該存儲液用于堿性磷酸酶測定試劑盒中精密度、相關性良好。且工藝簡單、減少了試驗設備，同時產品具有較好穩定性。

具體實施方式

實施例

1、配制工藝