[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)丁酸梭菌的發(fā)酵生產(chǎn)工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711183910.8
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN109825447A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發(fā)明（設計）人: 韓國寶;梁愛民;張?zhí)旌?/a>
• 申請（專利權）人: 朝陽華星生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/145
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所(普通合伙) 21225
• 代理人: 王佳佳

一種高產(chǎn)丁酸梭菌的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，在厭氧條件下，從菌種保存培養(yǎng)皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厭氧、30℃?37℃下培養(yǎng)24h?36h；將制備好的丁酸梭菌活化液接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度為30℃?37℃下進培養(yǎng)，作為二級培養(yǎng)種子液,接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃?37℃下進行一級種子液培養(yǎng)，發(fā)酵結束后，收集二級發(fā)酵種子液,接種至發(fā)酵罐中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵溫度30℃?37℃，培養(yǎng)全程通入氮氣，發(fā)酵結束后，收集罐內(nèi)發(fā)酵液。優(yōu)點是：將丁酸梭菌經(jīng)優(yōu)化菌種活化，發(fā)酵工藝優(yōu)化控制，確立了穩(wěn)定的產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)工藝，發(fā)酵后可生產(chǎn)出發(fā)酵活菌數(shù)高，大大減少了丁酸梭菌的生產(chǎn)成本，適合工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)。

技術領域

本發(fā)明涉及一種高產(chǎn)丁酸梭菌的發(fā)酵生產(chǎn)工藝。

背景技術

丁酸梭酸(Clostridium butyricum)是一種專性厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌，為內(nèi)生芽孢，具有很強的耐受性，能耐高溫、耐酸、耐膽汁，因而通過消化道不失活，在體外室溫下可保存三年以上不失效。并且對青霉素、氨芐西林、鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、氯霉素等有一定的抗性，因此這種制劑可和抗生素合用，提高療效。大量實驗證明它無任何毒副作用，被廣泛用于醫(yī)藥、功能性保健食品和動物飼料的添加劑及植物肥料。

目前，枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)仍停留在實驗室階段，生產(chǎn)成本高，不適合工化投產(chǎn)。而工業(yè)化生產(chǎn)，普遍存在產(chǎn)品活菌數(shù)低，產(chǎn)品沒有市場競爭。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種高產(chǎn)丁酸梭菌的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，該方法發(fā)酵條件合理，成本低廉，產(chǎn)品活菌數(shù)搞，產(chǎn)品質量穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的技術解決方案是：

一種高產(chǎn)丁酸梭菌的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其具體步驟如下：

1.1培養(yǎng)基組成

發(fā)酵培養(yǎng)基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化鈉0.2％、乙酸鈉0.2％、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.05％、硫酸鎂0.02％、硫酸錳0.02％、碳酸鈣0.05％、磷酸氫二鉀0.4％、水余量；

1.2菌種活化

稱取GAM培養(yǎng)基60.0g，加熱溶解1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至室溫，氯化血紅素2.5g，脫纖維兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，萬古霉素1mg，混勻，得到活化液；

在厭氧條件下，從菌種保存培養(yǎng)皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厭氧、30℃-37℃下培養(yǎng)24h-36h；

1.3一級種子培養(yǎng)

將制備好的丁酸梭菌活化液接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1％-5％，在溫度為 30℃-37℃、罐壓為0.05Mpa-0.10Mpa下進行一級種子液培養(yǎng)，發(fā)酵罐轉速為100r/min -200r/min，培養(yǎng)全程通入氮氣，并控制培養(yǎng)環(huán)境pH值為5.0-6.0，發(fā)酵培養(yǎng)10h，作為二級培養(yǎng)種子液；

1.4二級種子培養(yǎng)

將制備好的二級培養(yǎng)種子液接種到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1％-5％，在溫度為 30℃-37℃、罐壓為0.05Mpa-0.10Mpa下進行一級種子液培養(yǎng)，發(fā)酵罐轉速為100r/min -200r/min，培養(yǎng)全程通入氮氣，并控制培養(yǎng)環(huán)境pH值為5.0-6.0，發(fā)酵培養(yǎng)10h，發(fā)酵結束后，收集二級發(fā)酵種子液；

1.5發(fā)酵培養(yǎng)

將二級發(fā)酵種子液接種至發(fā)酵罐中，進行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為3％-5％，發(fā)酵溫度30℃-37℃，罐壓為0.05Mpa-0.10Mpa，發(fā)酵罐轉速為100r/min-200r/min，培養(yǎng)全程通入氮氣，并控制培養(yǎng)環(huán)境pH值為5.0-6.0，發(fā)酵培養(yǎng)24h-36h，發(fā)酵結束后，收集罐內(nèi)發(fā)酵液。