[發明專利]一種結核病檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201711183601.0
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107976543A
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 夏小兵;彭艷春;李子劍;陳智杰
• 申請（專利權）人: 蘇州因湃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 孫仿衛,周敏

1.一種結核病檢測試劑盒，其特征在于：其包括ESAT-6與CFP-10的蛋白混合液和抗人IFNg抗體。

2.根據權利要求1所述的結核病檢測試劑盒，其特征在于：所述的結核病檢測試劑盒還包括培養液。

3.根據權利要求1或2所述的結核病檢測試劑盒，其特征在于：所述的結核病檢測試劑盒還包括植物凝集素、人TNFa檢測試劑、TNFa蛋白標準品、生物素化的TNFa抗體、鏈親核素-藻紅蛋白交聯物、樣品稀釋液。

4.根據權利要求3所述的結核病檢測試劑盒，其特征在于：所述的ESAT-6與CFP-10的蛋白混合液中ESAT-6與CFP-10的濃度分別為9~11微克/毫升；所述的抗人IFNg抗體的濃度為0.9~1.1毫克/毫升；所述的植物凝集素的濃度分別為9~11微克/毫升。

5.一種如權利要求1至4中任一項所述的結核病檢測試劑盒在檢測結核病中的應用。

6.一種如權利要求1至4中任一項所述的結核病檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟（1）、向待測樣本中加入培養液，得到陰性對照組；

步驟（2）、向待測樣本中加入ESAT-6與CFP-10的蛋白混合液，得到第一檢測組；

步驟（3）、向待測樣本中加入ESAT-6與CFP-10的蛋白混合液以及抗人IFNg抗體，得到第二檢測組；

步驟（4）、將所述的陰性對照組、所述的第一檢測組和所述的第二檢測組分別進行培養、檢測得到各組待測樣本中的TNFa濃度，其中，所述的陰性對照組的待測樣本中的TNFa濃度記為A，所述的第一檢測組的待測樣本中的TNFa濃度記為B，所述的第二檢測組的待測樣本中的TNFa濃度記為C；

步驟（5）、計算（B-A）/A的值和（C-B）/A的值，并根據所述的（B-A）/A的值和所述的（C-B）/A的值進行結果的判定。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于：步驟（5）中進行結果判定的具體方法為：

當所述的（B-A）/A的值≤1.5時, 則結果判定為陰性無結核感染史；

當所述的（B-A）/A的值>1.5且≤2時，則結果判定為可疑結核感染；

當所述的（C-B）/A的值>2且所述的（B-A）/A的值>2時，且則結果判定為潛伏性結核感染；

當所述的（C-B）/A的值≤-2且所述的（B-A）/A的值>2時，且則結果判定為活動性結核。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于：所述的檢測方法還包括向待測樣本中加入植物凝集素得到陽性對照組，對所述的陽性對照組進行培養、檢測得到陽性對照組的待測樣本中的TNFa濃度的步驟。

9.根據權利要求8所述的檢測方法，其特征在于：當所述的陽性對照組的待測樣本中的TNFa濃度>50pg/mL時，則標本符合要求，能夠進行檢測結果的判定。

10.根據權利要求6或8所述的檢測方法，其特征在于：所述檢測的具體方法包括依次進行的如下步驟：

步驟（1）、收集各組培養后的上清液，用樣品稀釋液進行稀釋；用樣品稀釋液將TNFa蛋白標準品稀釋至多個濃度梯度；然后分別加入人TNFa檢測試劑，在24~26℃下密封混合50~70min；

步驟（2）、真空去除液體；

步驟（3）、加入所述的樣品稀釋液，繼續真空去除液體；

步驟（4）、加入生物素化的TNFa抗體，在24~26℃下密封混合50~70min，然后加入鏈親核素-藻紅蛋白交聯物，繼續混合25~35min；

步驟（5）、重復進行步驟（3）；

步驟（6）、加入所述的人TNFa檢測試劑并進行懸浮后進行讀數；

步驟（7）、通過多個濃度梯度的TNFa蛋白標準品的讀數繪制標準曲線，并將各組的讀數通過所述的標準曲線換算成各組的待測樣本的TNFa濃度。