[發明專利]一種谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法

有效

• 申請號: 201711183028.3
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN108004278B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 王慶波;李海軍;蘇移山;張英華;謝魯光;袁艷華
• 申請（專利權）人: 山東福瑞達生物科技有限公司
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C12N11/10;C12N11/14;C12R1/13;C12R1/125
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 朱彩霞

1.一種谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，步驟如下：

（1）谷氨酸產生菌活菌膠囊的制備

將黃色短桿菌種子液在4 000～6 000r/min離心3～5min，棄去上清，再加入同體積的生理鹽水得菌懸液；將10～20g/L海藻酸鈉溶液與黃色短桿菌菌懸液按10:1混合均勻，用一次性注射器滴入到25～35g/L 攪拌著的CaCl₂溶液中，固化60～120min，滅菌水沖洗，然后將其置于3～7g/L普魯蘭多糖溶液中緩慢成膜10～50min，再用 0.05%普魯蘭多糖溶液覆膜3～18min，得到谷氨酸產生菌活菌膠囊；

（2）發酵

以5%的接種量接種枯草芽孢桿菌，并同時接種5%谷氨酸產生菌活菌膠囊進行混合發酵培養即得γ-聚谷氨酸；

發酵結束后回收谷氨酸產生菌活菌膠囊：將發酵液用鹽酸調pH 2.5～3.5，過濾回收谷氨酸產生菌活菌膠囊，同時，向濾液中加入無水乙醇沉淀，干燥，得到聚谷氨酸粗品；

所述谷氨酸產生菌活菌膠囊回收后用于下一批次發酵；發酵批次大于20次。

2.如權利要求1所述的谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述黃色短桿菌種子液的制備方法是：將黃色短桿菌接種于裝有種子培養基的三角瓶中，接種量1%，32～35℃、150r/min培養，培養至種子液OD₆₀₀達到1.4～1.7；

所述黃色短桿菌的種子培養基的組成是：葡萄糖20～30g/L，尿素3～6g/L，酵母膏2～4g/L，MgSO₄ 0.1～0.5g/L，K₂HPO₄ 1～4g/L，pH 7.2～7.5。

3.如權利要求1所述的谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述枯草芽孢桿菌的培養方法是：將枯草芽孢桿菌接種于裝有種子培養基的三角瓶中，接種量1%，于32～37℃，180～220r/min搖床震蕩培養至OD₆₀₀達到1.8～2.2；

所述枯草芽孢桿菌的種子培養基組成是：葡萄糖5～10g/L，酵母粉3～5g/L，硫酸銨2～10g/L，MgSO₄ 0.1～1.0g/L，pH 7.2～7.5。

4.如權利要求1所述的谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步驟（2）發酵過程中所用發酵培養基：檸檬酸 2～5g/L，尿素3～6g/L，蛋白胨20～40g/L，MgSO₄ 0.1～0.5g/L，K₂HPO₄ 1～4g/L，葡萄糖100～200g/L，pH 7.2～7.5。

5.如權利要求1所述的谷氨酸產生菌活菌膠囊發酵生產γ-聚谷氨酸的方法，其特征是，所述步驟（2）發酵過程中發酵條件是：以5%的接種量接種枯草芽孢桿菌，并同時接種5%谷氨酸產生菌活菌膠囊進行混合發酵培養；溫度32～37℃，發酵罐條件下通氣攪拌培養：轉速100～300rpm、罐壓0.05～0.1MPa或搖瓶振蕩培養150～250r/min，發酵時間64～72h，pH不控制。