[發明專利]一種山蒼子種子超低溫保存方法

在審

• 申請號: 201711180452.2
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107691433A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 向華
• 申請（專利權）人: 長沙湘資生物科技有限公司
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00;A01N25/00;A01C1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種山蒼子種子超低溫保存方法，屬于藥材種子資源保存技術領域。

背景技術

山蒼子又名山雞椒、木姜子、過山香，為樟科木姜子屬，是珍貴芳香油料小喬木，其花、葉、果和樹皮可蒸餾提取山蒼子油，成熟的果實含油量最高。山蒼子油中含有檸檬醛、高級醇、有機酸，檸檬醛含量高達70％，是配制香精、香料和合成維生素A、E的主要原料，還可直接用于殺蟲滅菌，一直是我國出口創匯最大的天然植物精油。山蒼子主要分布于我國浙江、福建、湖南、湖北、江西、廣東、廣西、云南、貴州、臺灣等省(區)，其植株的生長環境主要在陽坡、采伐跡地、火燒跡地、荒山灌叢和稀疏林中。

山蒼子是一種將生態、經濟、社會效益高度統一的樹種，因其具有很高的經濟價值。目前，我國的山蒼子大部分仍處于野生狀態，加工的山蒼子85％以上采自野果，并且多以毀滅性的砍樹為主要采摘方式，這不僅嚴重破壞了生態平衡，還對山蒼子資源的繼續利用造成極壞的影響，導致資源枯竭和產量下降，使山蒼子油在目前供不應求。山蒼子適應性廣，耐瘠薄，截水圍土性能好，可用來治理疏林地水土流失。傳統栽培主要用種子繁殖，不僅種子發芽率低，優良性狀遺傳也不穩定，嚴重地影響著山蒼子油的產量質量。

目前種質資源保存方式為常溫、低溫保存山蒼子種子兩種方式。常溫保存中藥材種子，需要每年重新繁種更新，因為植物種子經過常溫保存，活力降低很快；低溫保存植物種子，在中國，建立了國家中期庫和國家種質庫，國家中期庫保存的溫度為4℃左右，相對濕度小于65％，一般設計貯藏種子的壽命為5～10年，國家種質庫為種質長期保存庫，庫中的溫度為-18℃左右，相對濕度小于50％，設計貯藏壽命達20年以上，也就是說種質在長期庫中保存，活力同樣隨著時間的推移降低，種質20年后一般需要更新繁種，不是永久的保存。

因此，為了安全保存山蒼子種質資源，研究探索一種安全而長久保存山蒼子種質資源的方法很有意義，它能夠減少或者避免種子更新繁種，省時省力，阻斷繁種更新的過程中種質間基因漂移等產生種質變異，保證種質的遺傳穩定性。

發明內容

本發明的目的是提供一種適合于山蒼子種子的超低溫保存法，該方法能夠補充現在山蒼子種質資源保存技術的不足，可以長期安全的保存山蒼子種質資源，為山蒼子種質資源保存提供一條新的有效的技術途徑。

本發明的目的是提供一種山蒼子種子超低溫保存方法，包括步驟以下：

(1)室溫下將山蒼子種子用水洗凈，用營養液培育20～50min后，取出培育過的山蒼子種子；

(2)培育過的山蒼子種子放入凍存管中，再加入抗凍液進行室溫溫育15～35min，再將其放入梯度降溫盒中；

(3)將帶有山蒼子種子的梯度降溫盒放入低溫冰箱中，使其降溫盒的溫度在-35℃～-60℃，降溫速度為-1℃/min，然后取出降溫盒，馬上將此降溫盒放入液氮中，進行液氮低溫保存備用；

(4)經低溫保存6年后，再將降溫盒從液氮中取，緩慢解凍，洗凈后用于種子發芽。

所述山蒼子種子為當年收獲鮮種，自然曬干，種子含水量為6～15％。

在一個具體方案中，步驟(1)中所述營養液指MS液體培養液，還包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亞砜。

所述營養液優選105～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。

在一個具體方案中，步驟(2)中所述梯度降溫盒中含有100％甘油或異丙醇，可以重復使用。

在一個具體方案中，步驟(2)中所述抗凍液是指MS液體培養液，還包含有2.5～3.6mol/L甘油、1.6～2.5mol/L二甲基亞砜和0.5～0.8mol/L蔗糖。

所述抗凍液優選105～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。

在一個具體方案中，步驟(3)中所述低溫冰箱的溫度要求一般在-70℃以下。

山蒼子上述所保存的山蒼子種子進行解凍時，若室溫超過20℃，將凍存管從液氮中取出，直接利用室溫自然解凍；若室溫低于20℃，將凍存管從液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解凍。解凍完后，取出凍存管中山蒼子種子，再用自來水或者蒸餾水洗滌3～5次，清洗后山蒼子種子直接用于培養。

技術效果

1、本發明進行山蒼子超低溫保存，工藝簡單，穩定性可靠，保存后的山蒼子種子的發芽率和鮮種的發芽率無顯著性差異，發芽試驗結果表明超低溫保存后山蒼子種子發芽率高達90％以上。