[發明專利]一種同時測定普魯卡因、青霉素和鏈霉素含量的液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 201711178591.1
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107884498A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 畢海林;蘇玲;肖裕章;張超;袁啟峰
• 申請（專利權）人: 重慶方通動物藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種同時測定普魯卡因、青霉素和鏈霉素含量的液相色譜分析方法。

背景技術

目前，美國藥典已收錄了“普魯卡因青霉素-硫酸雙氫鏈霉素注射液”的質量標準，在美國藥典、歐洲藥典、英國藥典中對制劑中青霉素含量測定采用碘量法，該測定方法不完善、選擇性差，干擾因素多，國內尚未制定青霉素復方制劑的含量測定標準方法。而碘量法是基于氧化還原滴定的原理，要求較快完成滴定過程，配方中若使用的抗氧劑或其它輔料均可干擾滴定過程及結果，淀粉指示液加入時間點的把握等均可增大滴定結果的誤差。

鏈霉素采用抗生素微生物鑒定法中的濁度法進行測定。鏈霉素含量原理是檢測供試品對標準菌株的抗菌活性與標準品相比較計算得到，其檢測時間長(≥24h)、含量檢測誤差大，不利于半成品的質量控制。

發明內容

針對現有技術存在的上述不足，本發明的目的在于提供一種同時測定普魯卡因、青霉素和鏈霉素含量的液相色譜分析方法，旨在解決現有檢測方法中檢測不準確、檢測時間長等技術問題。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種同時測定普魯卡因、青霉素和鏈霉素含量的液相色譜分析方法，包括以下步驟：

1)分別將普魯卡因、青霉素和鏈霉素的標準品用流動相溶解，分別配制成濃度為2mg·mL^-1、2mg·mL^-1和2mg·mL^-1的溶液，再分別濾去雜質，制成普魯卡因、青霉素和鏈霉素對照品標準溶液待用。

2)將普魯卡因、青霉素和/或鏈霉素的供試品用流動相溶解，配制成濃度1.0mg/ml的溶液，過濾，制成供試品溶液待用。

3)分別取步驟1)配制的普魯卡因、青霉素和鏈霉素對照品標準溶液，配制梯度濃度的標準溶液；然后分別使用液相色譜在檢測波長190～250nm下進行分析，并根據分析得到的液相色譜分別繪制普魯卡因、青霉素和鏈霉素的標準曲線。

4)在步驟3)的相同液相色譜條件下檢測步驟2)制得的供試品溶液，再利用步驟3)得到的普魯卡因、青霉素和鏈霉素的標準曲線來計算普魯卡因、青霉素/或鏈霉素的含量。

其中：在步驟1)中，所述的流動相為有機相與含離子對的磷酸緩沖液的混合物；其中，有機相與含離子對的磷酸緩沖液的體積比為(5～30)：(70～95)，所述的有機相為乙腈或甲醇，所述的含離子對的磷酸緩沖液為硫酸鈉、辛烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀和磷酸的混合水溶液。

所述的含離子對的磷酸緩沖液的配制方法為：將15.91g無水硫酸鈉、1.7g辛烷磺酸鈉溶解于700mL水中，再加入57mL磷酸鹽緩沖溶液，加水定容至1000mL制得；其中，磷酸鹽緩沖溶液為濃度為27.2g/L磷酸二氫鉀用濃度為22.5g/L的磷酸調節pH至3.0得到。

優選地，有機相與含離子對的磷酸緩沖液的體積比為12：88。

在步驟3)和4)的液相色譜中，流速為0.3～1.5mL/min，柱溫為25～40℃，進樣量為20μL。

優選地，所述的檢測波長為205nm；所述的流速為1.0mL/min。所述的柱溫為40℃。

在步驟3)和4)的液相色譜中，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

為了提高準確性，重復步驟4)一次以上，取平均值進行計算普魯卡因、青霉素/或鏈霉素的含量。

本發明用普通十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以離子對緩沖液—有機相作為流動相對普魯卡因、青霉素、鏈霉素三種成分進行等度洗脫，這是因為普魯卡因為有機堿，青霉素為有機酸，鏈霉素為有機堿類離子化合物，其中鏈霉素電離能力強，在反相色譜系統中介乎無保留。因此選擇鏈霉素的色譜條件是本發明的關鍵技術之一。本發明選用離子對試劑作用與鏈霉素，使鏈霉素能在反相色譜柱上保留，同時通過流動相pH值、有機相比例共同使鏈霉素達到最佳的分離和保留；普魯卡因為有機堿，在酸性條件下能快速洗脫，減少有機相比例延長普魯卡因的保留時間；青霉素為有機酸在酸性流動相也可得到很好；三種成分中，鏈霉素紫外特征最弱，經試驗篩選205nm作為檢測波長，普魯卡因、青霉素在205nm波長有良好的響應；本發明中先從戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉中篩選出適用于鏈霉素分離的離子對試劑，最終卻辛烷磺酸鈉作為分析鏈霉素的離子對試劑；堿性離子對試劑的加入會延長普魯卡因的保留時間，在不影響鏈霉素保留時間加入約15％乙腈，增強普魯卡因和青霉素的洗脫。

與現有的技術相比，本發明具有如下有益效果：