[發明專利]一株季也蒙畢赤酵母及其應用

有效

• 申請號: 201711178452.9
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107937284B
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 王彩霞;孟璐璐;李桂舫;張清明;李保華
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;A01N63/32;A01P3/00;C12R1/645
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

1.一株防治蘋果果實輪紋病的季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1，于2015年12月31日保藏于：中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC NO:M2015814。

2.一種利用權利要求1所述的季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制備的生防菌劑。

3.權利要求2所述的生防菌劑在防治葡萄病害中的應用，所述葡萄病害為由病原真菌引起的葡萄白腐病、灰霉病、青霉病、褐腐病和炭疽病；

所述葡萄白腐病病原菌為白腐墊殼孢(Coniella diplodiella)、灰霉病病原菌為灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、青霉病病原菌為青霉菌(Penicillium spp)、褐腐病病原菌為鏈核盤菌(Monilinia spp)和炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述的季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1用于增強植物體內防御酶的活性，所述的防御酶為CAT、PPO、SOD和POD。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：使用時將季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制備成菌懸液。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：制備得到的季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌懸液通過噴施或浸潤的方式施用于葡萄。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：制備得到的季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌懸液濃度為10³～10⁸cfu·mL^-1。

8.根據權利要求2所述的生防菌劑，其特征在于，所述生防菌劑的制備方法如下：

1)培養基的制備：

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)瓊脂培養基：酵母提取物(Yeast Extract)10g，蛋白胨(Peptone)20g，溶解于900mL水中，加入20g瓊脂粉，121℃高壓蒸汽滅菌20min后，加入100mL已滅菌的20％葡萄糖溶液；

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液體培養基：酵母提取物10g，蛋白胨20g，溶解于900mL水中，121℃高壓蒸汽滅菌20min后，加入100mL已滅菌的20％葡萄糖溶液，分裝于250mL三角瓶中，裝液量為80mL；

2)季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的活化：將菌株按無菌操作要求劃線接種于YPD瓊脂培養基中，30℃恒溫培養2-3d；

3)季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的液體培養：挑取步驟2)中活化的Y-1菌株的單菌落，接種于瓶裝量為80mL/250mL的YPD液體培養基中，150r·min^-1，30℃恒溫震蕩培養24h，得到菌株Y-1發酵種子液，將所述發酵種子液按1:100的接種量接種到所述的YPD液體培養基中，30℃恒溫震蕩培養48h，得到濃度為10⁷cfu·mL^-1的季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的細胞培養液；所述細胞培養液為生防菌劑。

9.根據權利要求2所述的生防菌劑，其特征在于，所述生防菌劑的制備方法如下：

1)培養基的制備：

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)瓊脂培養基：酵母提取物(Yeast Extract)10g，蛋白胨(Peptone)20g，溶解于900mL水中，加入20g瓊脂粉，121℃高壓蒸汽滅菌20min后，加入100mL已滅菌的20％葡萄糖溶液；

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液體培養基：酵母提取物10g，蛋白胨20g，溶解于900mL水中，121℃高壓蒸汽滅菌20min后，加入100mL已滅菌的20％葡萄糖溶液，分裝于250mL三角瓶中，裝液量為80mL；

2)季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的活化：將菌株按無菌操作要求劃線接種于YPD瓊脂培養基中，30℃恒溫培養2-3d；

3)季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的液體培養：挑取步驟2)中活化的Y-1菌株的單菌落，接種于瓶裝量為80mL/250mL的YPD液體培養基中，150r·min^-1，30℃恒溫震蕩培養24h，得到菌株Y-1發酵種子液，將所述發酵種子液按1:100的接種量接種到所述的YPD液體培養基中，30℃恒溫震蕩培養48h，得到濃度為10⁷cfu·mL^-1的季也蒙畢赤酵母Y-1菌株的細胞培養液；

4)將步驟3)中制備的細胞培養液，在4℃條件下，6000r·min^-1離心10min，收集菌體沉淀用無菌水重新懸浮，得到10⁸cfu·mL^-1的菌懸液；

5)稀釋：將步驟4)中制備的10⁸cfu·mL^-1的菌懸液稀釋0-100倍；得到生防菌劑。