[發明專利]912位點發生突變的RanBP9突變基因及其應用

有效

• 申請號: 201711177375.5
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107641626B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 黃志清;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 黃志清
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種發生了c.912G>T突變的RanBP9突變基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，它是人類男性生精障礙的致病基因。本發明還提供了基于多重PCR捕獲聯合二代DNA測序的RanBP9致病基因外顯子突變篩選方法，最后利用Sanger測序對突變進行驗證；其中PCR捕獲引物組包含擴增引物序列SEQ ID NO:7?12，用于Sanger測序的RanBP9基因c.912G>T突變片段的擴增引物序列如SEQ ID NO:11?12所示。本發明提供的RanBP9致病基因形式尚未被報道，可以為該病致病機理的解析和檢測方法的構建等提供依據和奠定基礎。

技術領域

本發明涉及突變基因及其檢測方法，特別涉及人類男性生精障礙致病基因RanBP9及其檢測方法。

背景技術

生育年齡的男性中約有5%有不育問題，其中大部分的原因不明。男性生育能力依賴于有功能的精子，精子在睪丸內產生和發育的過程是由數個基因控制，這些基因的表達過程若受到干擾，就會影響精子的形成從而造成男性不育。研究（Jianqiang Bao, et al.,RAN-Binding Protein 9 is Involved in Alternative Splicing and is Critical forMale Germ Cell Development and Male Fertility. PLoS Genetics. 2014，10(12):1-14.）表明，RanBP9基因即RAN binding protein 9編碼基因在老鼠睪丸中可以調控生育相關基因的表達，以保證精子的正常生成，因此RanBP9基因是目前精子形成過程中的關鍵調控因素之一。RanBP9基因編碼RanBP9蛋白，RanBP9蛋白是在細胞內多個區域調節不同功能的多種蛋白復合體的關鍵組成部分，發揮支架蛋白的角色。RanBP9蛋白功能的發揮與多種生物過程相關，例如細胞增殖和凋亡、性腺的生長和發育等。如果RanBP9基因失去功能，精子的生成過程就會受到干擾，從而嚴重減低男性生育力造成男性出現少精、弱精等生精障礙。然而目前RanBP9基因在人類男性生精障礙中的遺傳變異特征尚未得到解析，限制了該基因的研究和應用。

為了系統解析RanBP9基因在人類男性生精障礙中的致病突變，本發明設計和合成了覆蓋RanBP9基因全部外顯子的PCR捕獲引物組，再結合二代DNA測序技術對25個男性生精障礙患者樣本進行捕獲測序，最終解析出了RanBP9基因的6種候選致病突變形式，所發現的突變均經Sanger測序確證；之后針對這6種致病基因突變，利用Sanger測序分析對應家系中其它成員的樣本，發現攜帶致病基因突變的男性均存在生精障礙從而致病基因突變得到了確證。進一步的，采用同樣的方法在另外37個人類男性生精障礙患者和100個生精正常的健康男性樣本中進行了驗證。本發明提供的男性生精障礙致病基因RanBP9突變均尚未見報道，其對于該病的解析和檢測均具有潛在的重要價值。

發明內容

本發明提供了RanBP9基因引起的人類男性生精障礙的6種突變基因形式，同時提供了基于PCR捕獲測序的RanBP9致病基因檢測方法；這些可以為RanBP9基因引起的男性生精障礙致病機理的解析和藥物開發、致病基因篩查和檢測等提供依據和奠定基礎。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案如下：

本發明提供了RanBP9基因的6種突變基因形式（圖1），其序列分別如SEQ ID NO:1-6所示，對應的突變分別為c.126C>T突變、c.133C>T突變、c.702T>G突變、c.912G>T突變、c.921A>G突變和c.926delC突變。RanBP9基因的這6種突變形式經檢測和驗證，均為人類男性生精障礙致病基因，可以被應用于構建人類男性生精障礙基因檢測方法以及制備人類男性生精障礙基因診斷芯片、基因檢測試劑盒和治療藥物中。