[發明專利]可用于檢測與結直腸癌相關的PRMT6基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201711172986.0
• 申請日: 2017-11-22
• 公開（公告）號: CN108118091B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 段世偉;潘冉冉
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 何仲

本發明公開了可用于檢測與直腸癌相關的PRMT6基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用，特點是包括一對PRMT6基因啟動子區熒光定量甲基化特異性擴增引物，具體核苷酸序列如下：上游引物：5'?AGCGATTAGATGTTGGAATG?3'；下游引物：5'?CCACACCATAATACTACTTCAC?3'，該試劑盒應用在制備檢測直腸癌試劑或者輔助診斷直腸癌試劑中，優點是檢測方便、針對性強、檢測準確率高，基因PRMT6基化水平與直腸癌的患病率呈負相關，可通過對樣品DNA甲基化水平測定輔助診斷直腸癌。

技術領域

本發明涉及一種輔助診斷結直腸癌的檢測試劑盒，尤其是涉及一種可用于檢測與結直腸癌相關的PRMT6基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用。

背景技術

結直腸癌是世界上第三大惡性腫瘤，近年來中國結腸癌發病率由7%激增到13%。結直腸癌發病與生活方式、遺傳、大腸腺瘤等關系密切，且發病年齡趨老年化。癌胚抗原（CEA）作為最廣泛使用的腫瘤標志物之一，已經有研究指出其敏感性和特異性不足以用于結直腸癌的診斷，特別是早期診斷。 糞便隱血試驗（FOBT）是廣泛用于結直腸癌檢測的無創方法，通常包括gFOBT和iFOBT兩種。前者檢測易受食品、藥品等因素的影響；后者如果從采樣到實驗室處理的時間超過5天，檢測率就會下降。盡管結腸鏡檢查具有較高的靈敏度和特異性，但腸道出血，腸穿孔，感染等并發癥仍然存在，同時患者對其依從性較差。此外，結直腸癌是一種復雜的疾病，主要受遺傳因素（例如：原癌基因和DNA修復基因突變，腫瘤抑制基因功能喪失）和環境因素影響。作為遺傳學和環境的橋梁因子，表觀遺傳修飾通過DNA甲基化，基因組印跡，組蛋白修飾等調控基因表達。此外，DNA甲基化作為一種重要的表觀遺傳學修飾方法，被大量應用與癌癥篩檢、診斷以及治療中。大量研究表明DNA甲基化的異常變化可引起基因組染色質結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變，從而控制基因表達，引發癌癥。因此，表觀遺傳學改變在腫瘤形成和發展過程中發揮著重要作用。有研究指出在結直腸癌的早期和晚期都記錄了異常基因甲基化，其有可能可以用作結直腸癌理想的篩選生物標志物。

熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產物進行標記跟蹤，能實時監控反應過程，并結合相應的軟件進行產物分析的PCR技術。該方法較其他傳統甲基化檢測方法在時間上大幅縮減，同時，可以對極微量的DNA基因水平上的改變進行檢測和定量。因此，定量檢測腫瘤患者中組織中DNA的表觀遺傳變化對腫瘤的早期診斷、療效評估、發生機制等研究具有重要意義，更加適合醫院或科研院所操作。

編碼精氨酸N-甲基轉移酶家族蛋白的精氨酸N-甲基轉移酶6（PRMT6）基因位于染色體1p13.3上。PRMT的主要功能是在精氨酸殘基上甲基化蛋白質的酶，大量實驗研究發現其可以甲基化組蛋白，這被認為可以影響癌癥的發生和進展。此外，有報道稱;與染色質結合的精氨酸N-甲基轉移酶家族的成員充當轉錄共激活劑或共阻遏物，并且已經在不同的癌癥類型（例如前列腺癌，乳腺癌和肺癌）中被發現。目前，國內外還沒有公開任何關于在結直腸癌中用實時熒光定量PCR檢測PRMT6基因啟動子區甲基化程度的檢測試劑盒相關研究報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測方便、針對性強、檢測準確率高的的可用于檢測與結直腸癌相關的PRMT6基因啟動子區甲基化程度的試劑盒及其應用，其中基因PRMT6基化水平與結直腸癌的患病率呈負相關，可通過對樣品DNA甲基化水平測定輔助診斷結直腸癌。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：可用于檢測與結直腸癌相關的PRMT6基因啟動子區甲基化程度的試劑盒，包括一對PRMT6基因啟動子區熒光定量甲基化特異性擴增引物，具體核苷酸序列如下：上游引物：5'- AGCGATTAGATGTTGGAATG-3'；

下游引物：5'- CCACACCATAATACTACTTCAC-3'。