[發(fā)明專利]一種二氯取代的II型鹵化聚酮類化合物的制備方法及抗菌活性應用

有效

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• 申請日: 2017-11-22
• 公開（公告）號: CN107937453B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設計）人: 錢聲艷;楊彩玲;劉建國;王倩;王苗;王方遠
• 申請（專利權）人: 遵義醫(yī)科大學
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;A61K31/357;A61P31/04;A61P31/10;C12R1/465
• 代理公司: 重慶強大凱創(chuàng)專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 張顯琴

本專利申請公開了一種二氯取代鹵化II型聚酮類化合物zunyimycin A制備方法，該化合物來源于鏈霉菌Streptomyces sp.FJS31?2菌株(菌株保藏號：CGMCC4.7321)次級代謝產(chǎn)物，通過對菌株活化、擴大培養(yǎng)、分離，最終進行結構鑒定確定。可以運用于治療革蘭氏陽性細菌如金黃色葡萄球菌(MRSA)及其耐藥菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等感染疾病的治療；運用于治療革蘭氏陰性細菌如產(chǎn)生超廣譜β?內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌(ESBL)、變形桿菌、布氏桿菌等感染疾病的治療；運用于真菌感染疾病的治療如白色念珠菌。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物技術領域，具體涉及一種二氯取代的II型鹵化聚酮類化合物的制備 方法及抗菌活性應用，尤其涉及一種二氯取代鹵化II型聚酮類化合物zunyimycin A制備方 法及抗菌活性應用。

背景技術

鏈霉菌來源的天然產(chǎn)物往往具有很好的生物活性和成藥潛力，是抗生素的重要來源。但 隨抗生素的濫用，許多“超級細菌”的出現(xiàn)，給臨床上病原菌感染等疾病的治療帶來巨大的 挑戰(zhàn)，有些超級細菌出現(xiàn)了無藥可醫(yī)的現(xiàn)象。鑒于當前日益嚴峻的抗菌形勢，加大抗生素研 發(fā)力度，探索和研發(fā)新抗生素成為當務之急，也是解決抗生素耐藥問題有效途徑。

鏈霉菌來源的鹵化天然產(chǎn)物具有結構新穎、活性良好等特點。如：具有抗白血病活性的 氯化聚酮neocarzillin A；對小鼠腫瘤細胞具有抑制作用的BE－19412A及其甲基化產(chǎn)物； 對人體不同腫瘤細胞具有抑制作用的聚酮chinikomycins A；對多耐藥結核分枝桿菌有殺菌 作用的chlorophenazine。此外臨床上抗感染的萬古霉素，替考拉寧以及2014年美國FDA 批準上市的抗耐藥菌感染抗生素新藥達巴萬星，奧利萬星及泰地唑胺，它們都屬于鹵化天然 產(chǎn)物。

本課題組前期從貴州特殊生境梵凈山土壤中分離鑒定一株命名為Streptomycessp. FJS31-2菌株(菌株保藏號：CGMCC4.7321)，并通過次級代謝產(chǎn)物研究，分離鑒定得到新型 氯化聚酮系列的化合物zunyimycin A、zunyimycin B、zunyimycin C，如中國專利CN106167495A公開的一種鹵化II型聚酮類抗生素化合物、制備方法及其應用，該鹵化II 型聚酮類抗生素化合物即為化合物zunyimycin A，

Zunyimycin A結構式

但是由于制備方法的缺陷，獲得的產(chǎn)量較小，得率也低，同時因為此產(chǎn)量很少(每個化 合物大約7mg左右)，所以只做了耐藥金黃色葡萄球菌活性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明意在提供一種二氯取代的II型鹵化聚酮類化合物的制備方法，以獲得較高的產(chǎn) 量，同時對其他抗菌活性進行研究。

一種二氯取代的II型鹵化聚酮類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步 驟一、菌株的活化：從-80℃冰箱中取出保存的鏈霉菌Streptomyces sp.FJS31-2菌株，菌 株的保藏編號為CGMCC NO.4.7321，保藏日為2016年6月2日，保藏單位為中國微生物菌種 保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。活化時： 以無菌接種環(huán)挖取菌株的孢子，十字劃線接種于基礎培養(yǎng)基的平板上，28℃下靜置培養(yǎng)3d， 挑取單菌落傳代至第三代后放大培養(yǎng)；

步驟二、發(fā)酵產(chǎn)物的發(fā)酵培養(yǎng)：選用改良GYD固體培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加入瓊脂 粉，28℃，靜置培養(yǎng)17d，菌體連同培養(yǎng)基搗碎，加入乙酸乙酯萃取兩次，合并萃取液，減壓濃縮，得到發(fā)酵產(chǎn)物；

步驟三、發(fā)酵產(chǎn)物純化分離：a、發(fā)酵產(chǎn)物用丙酮溶劑溶解后，與硅膠粉混合后采用氯 仿-丙酮按照純氯仿；30:1；15:1；10:1；5:1；2:1；純丙酮，依次7個梯度洗脫收集洗脫劑，洗脫劑旋轉蒸發(fā)減壓回收后，用展開劑展開，合并365nm熒光顯黃綠色、8％硫酸乙醇顯黃色、 遷移值(Rf)在0.5的點，合并后稱量得到F5；