[發明專利]一種四肽-21的液相合成方法

有效

• 申請號: 201711160534.0
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN107857799B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 李晨;陳科;王惠嘉;張忠旗;郭添;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K5/103
• 分類號: C07K5/103;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種四肽-21的液相合成方法，其特征在于：采用液相合成法分別合成Gly-Glu的全保護片段Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe和Lys-Gly的全保護片段Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH，然后將Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH脫除Fmoc基團后與Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe進行縮合反應生成Boc-Gly-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-OH，最后脫除所有保護基團得到H-Gly-Glu-Lys-Gly-OH，即四肽-21；

上述Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe的合成方法為：以四氫呋喃為溶劑，將Boc-Gly-OH與N,N′-二環己基碳二亞胺、N-羥基丁二酰亞胺在0～10℃條件下反應2～5小時，過濾，向濾液中加入H-Glu(OtBu)-OMe·HCl和碳酸氫鈉水溶液，在0～10℃條件下反應1～2小時后，升至室溫反應8～14小時，反應完后分離純化，得到Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe；

上述Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH的合成方法為：以四氫呋喃為溶劑，將Fmoc-Lys(Boc)-OH與N,N′-二環己基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑、N,N′-二異丙基乙胺在-5～0℃條件下反應2～4小時，過濾，向濾液中加入H-Gly-OH和有機堿，在0～5℃下反應1～2小時后，升至室溫反應8～10小時，反應完后分離純化，得到Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH。

2.根據權利要求1所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于：所述Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe的合成方法中，Boc-Gly-OH、N,N′-二環己基碳二亞胺、N-羥基丁二酰亞胺、H-Glu(OtBu)-OMe·HCl、碳酸氫鈉的摩爾比為1:1.3～1.5:1.1～1.3:1.05～1.10:3.0～4.0。

3.根據權利要求1所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于：所述Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH的合成方法中，Fmoc-Lys(Boc)-OH、N,N′-二環己基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑、N,N′-二異丙基乙胺、H-Gly-OH、有機堿的摩爾比為1:1.2～1.5:2.0～3.0:2.0～3.0:1.0～1.3:3.0～4.0。

4.根據權利要求1或3所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于：所述的有機堿為N-甲基嗎啡啉、N-甲基吡咯烷酮、N,N′-二異丙基乙胺中的任意一種。

5.根據權利要求1所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于將Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH脫除Fmoc基團后與Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe進行縮合反應的具體操作為：將Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH溶于N,N-二甲基甲酰胺，在哌啶作用下室溫反應2～3小時脫除Fmoc基團，再與Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe反應，反應完后將反應液倒入水中，萃取，酸洗，干燥，減壓脫除溶劑，得到Boc-Gly-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-OH；然后在切割液中脫除Boc-Gly-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gly-OH的所有保護基團，分離純化，得到H-Gly-Glu-Lys-Gly-OH，即四肽-21。

6.根據權利要求5所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于：所述縮合反應的具體操作中，Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH、Boc-Gly-Glu(OtBu)-OMe、哌啶的摩爾比為1:1.0～1.3:3～5。

7.根據權利要求5所述的四肽-21的液相合成方法，其特征在于：所述的切割液為三氟乙酸與三異丙基硅烷、純水體積比為90:5:5的混合液。