[發(fā)明專利]鉤吻中多種有效成分同時檢測的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定量方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711158978.0
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN107894475B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉兆穎;劉艷純;楊昆;孫志良
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所(普通合伙) 43114
• 代理人: 張偉;魏娟

本發(fā)明公開了鉤吻中多種有效成分同時檢測的液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜定量方法，以鉤吻素甲甲醇溶液、鉤吻素子甲醇溶液、鉤吻素己甲醇溶液和鉤吻堿戊甲醇溶液為對照樣本溶液，以鉤吻提取液為待測樣本溶液，采用高效液相色譜三重四級桿質(zhì)譜儀檢測，根據(jù)檢測結(jié)果計算待測樣本溶液中多種有效成分的含量。本發(fā)明的定量分析方法穩(wěn)定可靠，簡單高效，靈敏度與準確度高，具有廣泛的實際應(yīng)用性，能夠應(yīng)用于任何鉤吻及其衍生產(chǎn)品的檢測與定量分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種相對定量分析方法，尤其涉及同時檢測鉤吻中多種化合物的相對定量分析方法；屬于中草藥分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鉤吻為馬錢科葫蔓藤植物的全草，鉤吻中主要含有生物堿、環(huán)烯醚萜類、酚酸類、三萜類和油脂類等化學成分，迄今為止，國內(nèi)外文獻報道從鉤吻植物中一共分離得到300余個化合物。鉤吻具有抗腫瘤、抗炎和神經(jīng)性疼痛和增強免疫等作用，主要用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎疼痛、神經(jīng)性疼痛、促進動物生長等。

目前，已報道從鉤吻中分離得到120余個吲哚類生物堿，按其結(jié)構(gòu)分為蛇根莖類(sarpagine)、鉤吻素子類(koumine)、胡蔓藤乙素類(humantenine)、甲基鉤吻素乙類(gelsedine)、鉤吻素甲類(gelsemine)、育亨賓類(yohimbane)六大類。環(huán)烯醚萜類和酚酸類等非生物堿已分離得到100余種。

關(guān)于鉤吻成分含量測定的文獻報道主要有：李晶晶等采用酸性染料比色法測定鉤吻及其制劑的總生物堿含量；粟建明等建立單一內(nèi)標多控法同步測定鉤吻中鉤吻素甲和鉤吻素子的含量(中藥材，2013，36(10)：1626-1631)；利用HPLC法測定鉤吻莖中胡蔓藤堿丙、鉤吻素甲、鉤吻素子、鉤吻素己、鉤吻綠堿和胡蔓藤堿乙的含量(藥物分析雜志，2018，37(4)：595-501)；王毅等采用HPLC法，以鉤吻素甲和鉤吻素子作為對照品，對9批鉤吻樣品中化學成分進行指紋圖譜研究，進行主成分和聚類分析，不同產(chǎn)地來源的鉤吻其內(nèi)在化學成分均有差異，呈現(xiàn)出不同的分類(刑事技術(shù)，2016，41(1)：50-53)。但由于鉤吻中化學成分多，在液相上也出現(xiàn)了幾個代表性的峰，因此，僅采用2-3個有標準品的化合物進行鉤吻的質(zhì)量控制存在局限性，需要用更多指標成分才能監(jiān)測其質(zhì)量控制。在無標準品情況下，如何進行鉤吻多成分分析是制約該方法的關(guān)鍵技術(shù)問題。

鉤吻由于其毒性的限制，在市場上并未作為任何一款產(chǎn)品的銷售，但由于其促進動物生長的效果，在2015版中獸藥典中收錄，因此，在獸醫(yī)的臨床存在一定的廣泛應(yīng)用。目前，鉤吻提取的方法有多種，如醇提、水提、酸提堿沉等，提取工藝各不相同，質(zhì)量參差不齊，為了防止鉤吻中毒等不良事件的發(fā)生，確保以鉤吻為原料的相關(guān)成分的質(zhì)量穩(wěn)定可控，需要對鉤吻中的有效成分進行多成分分析相對定量分析。

中國專利(ZL201510968 431)公開了一種快速檢測與鑒定鉤吻中化學成分的分析方法，并對化合物的成分進行了質(zhì)譜裂解規(guī)律和結(jié)構(gòu)分析(Fitoterapias，2017，121：94-105)。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中在鉤吻化合物成分檢測的方法難以實現(xiàn)同時對鉤吻化合物中多種成分同時作定量分析等技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是在于提供一種同時檢測鉤吻中多種化合物的相對定量分析方法，該方法完善了鉤吻質(zhì)量評價體系，定量分析方法穩(wěn)定可靠、靈敏準確、檢測周期短，且樣品前處理簡單、可解決對照品數(shù)量不足的情況下對于鉤吻的質(zhì)量監(jiān)控。

為了實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種鉤吻中多種有效成分同時檢測的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定量方法，其包括如下步驟：以鉤吻素甲甲醇溶液、鉤吻素子甲醇溶液、鉤吻素己甲醇溶液和鉤吻堿戊甲醇溶液為對照樣本溶液，以鉤吻提取液為待測樣本溶液，采用高效液相色譜三重四級桿質(zhì)譜儀檢測，根據(jù)檢測結(jié)果計算待測樣本溶液中多種有效成分的含量。