[發明專利]一種用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法

在審

• 申請號: 201711158456.0
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN107966558A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 魏雙施;李勇;段生寶;蒙青林;王紅梅;丁少華;陳曄洲
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)11369
• 代理人: 韓飛

技術領域

本發明屬于體外快速診斷領域，具體涉及一種用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法。

背景技術

分析與診斷技術一直是體外診斷(IVD)中快速發展的一部分。生化、免疫與分子，可分為臨床實驗室診斷和即時診斷(POCT)。檢測對象也包括激素小分子、抗原和抗體、核酸等。大多數的檢測技術都是基于兩種或者多種成分之間發生直接或者間接的特異性識別與結合反應，從而形成可檢測的多元復合物。最常用到的捕獲試劑就是抗體，它可以與各種樣本(如全血、血漿、血清、尿液、唾液等)中的目標靶分子(某種特異性的抗原，如乙肝表面抗原)結合，在通過指示系統的顯示產生陽性反應信號。隨著技術的不斷進步和法陣，捕獲物質和檢測物質的范圍都在擴大，比如噬菌體展示肽庫篩選得到的特異性結合物可以方便的制備而且其親和力也大大提高。多年的發展證明，免疫分析技術在臨床檢測中具有極大的價值。

然而，為了得到精確的結果，免疫學試驗常常需要一系列繁復和耗時的步驟，也需要準確和專業的技術知識才可以操作。近年來，雖然有各種POCT的檢測方法，如膠體金側向流分析技術的出現，縮短了檢測的時間和步驟，但是由于其自身的原因導致其靈敏度較低，也大大限制了膠體金側向流分析技術的發展和應用。

為了實現這一目的，已經產生了大量的各種形狀、構造和設計的用于體外診斷檢測裝置。本質上，都是將特異性的捕獲物質直接或間接的固定在檢測載體上，然后檢測樣本中是否存在靶標物質。如果樣本中存在靶標物質，它將于捕獲試劑結合，隨后就可以用多種指示系統來顯示樣本中存在的靶標物質。

經典的用于體外診斷檢測方法主要分為酶標法和金標法，酶標法采用的反應機構就是普通的孔板，如圖4所示，檢測載體b修飾于孔板a底部，待測液c中能夠產生特異性識別與結合反應的界面僅限于檢測載體b的單個表面，因此這種反應機構的缺點是孵育期較長，導致整體檢測時間長(通常在3小時左右)，靈敏度可達到50pg/mL左右。金標法采用的反應機構主要基于試紙條，檢測載體(通常為NC膜)修飾于試紙條上，檢測時將試紙條插入待測液中或者將待檢樣本滴加于試紙條的樣本墊上，借助試紙條另一端吸水紙的虹吸作用，使待檢樣本單向、單次通過檢測載體，因此這種反應機構的缺點是捕獲物與目標反應物的接觸時間短，結合率低，最終導致其檢測靈敏度低(能達到10ng/mL左右)，優點是檢測速度快，通常在15-30分鐘即可得到結果。

發明內容

針對現有技術中的不足之處，本發明旨在提供一種用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，以期能夠同時兼顧反應效率和檢測靈敏度。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，該目標靶分子存在于液體樣本中，將該液體樣本滴加于固定化載體上，所述固定化載體上設有特異性捕獲目標靶分子的捕獲試劑；

其中，所述固定化載體的一側可拆卸連接一氣密環境，該氣密環境具有氣壓可調功能；

通過調節該氣密環境的氣壓，使液體樣本往復運動于所述固定化載體但不脫離該固定化載體。

優選的是，所述的用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，其中，所述固定化載體具有多層立體微孔的空間結構，通過控制該氣密環境的氣壓，使液體樣本反復通過所述固定化載體中的多層立體微孔。

優選的是，所述的用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，其中，所述固定化載體被設置為：當液體樣本滴加于固定化載體時，在正常大氣壓條件下，僅依靠重力不使液體樣本發生懸滴。

優選的是，所述的用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，其中，所述氣密環境被設置為不干涉液體樣本的往復運動。

優選的是，所述的用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，其中，所述固定化載體被設置為不干涉目標靶分子與捕獲試劑的結合。

優選的是，所述的用于體外診斷的目標靶分子快速捕獲方法，其中，所述固定化載體的形態被設置為膜式、柱式或絮狀。

本發明的有益效果是：本發明通過使液體樣本反復通過固定化載體，增加了目標靶分子和捕獲試劑的接觸頻次，有效提高了目標靶分子的捕獲效率，同時該方法又可用于非特異性結合的物質洗滌，以降低背景干擾。

附圖說明

圖1為本案實現目標靶分子快速捕獲所采用的一具體實施例的結構示意圖。

圖2為液體樣本在減壓時的狀態示意圖。

圖3為液體樣本在增壓時的狀態示意圖。

圖4為現有技術中基于酶標法捕獲目標靶分子的原理示意圖。

具體實施方式