[發明專利]一種能逆轉腫瘤多藥耐藥性的茯苓提取物的制備

有效

• 申請號: 201711153526.3
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN108125993B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 沈雁;李小蓮;展文珍
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K31/575
• 分類號: A61K31/575;A61K36/076;A61P35/00
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 耿錕錕

本發明公開了一種茯苓提取物，該茯苓提取物中茯苓三萜含量為40％?90％，通過如下方法制備獲得：將茯苓粉碎，加入適量乙醇溶液，加熱條件下提取，抽濾，得濾液，合并濾液，濃縮，加入少量水，乙酸乙酯萃取多次，減壓干燥后，甲醇溶解，過濾，濾液減壓濃縮，冷凍干燥，得到固態茯苓提取物。本發明制備的茯苓提取物源于傳統中藥，體外實驗顯示該提取物具有抗腫瘤的活性，并能逆轉MCF/ADR的多藥耐藥性。

技術領域

本發明涉及一種具有逆轉腫瘤多藥耐藥性的茯苓提取物，其制備方法及應用。

背景技術

惡性腫瘤是惡性腫瘤是危害人類健康的主要疾病之一，而且發病率和病死率仍然呈現不斷上升的趨勢。手術、化療與放療是目前最常用的治療手段，單一的化療藥物已經不能滿足需要，聯合用藥已經成為治療腫瘤的必然趨勢。近年來發現中藥中很多活性物質均具有抗腫瘤的作用，在臨床上也具有一定的效果。目前，惡性腫瘤的死亡有94％與腫瘤的多藥耐藥性產生有關，尋求高效低毒的逆轉腫瘤多藥耐藥的方法已經成為研究熱點。

腫瘤多藥耐藥性(MDR)是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產生耐藥性的同時，對結構和作用機制完全不一樣的其他抗腫瘤藥物產生交叉耐藥性的現象。MDR產生的機制主要有：①膜蛋白介導的MDR，包括P-g糖蛋白介導的經典MDR理論，多藥耐藥相關蛋白介導的MDR，乳腺癌耐藥蛋白介導的MDR，肺耐藥相關蛋白介導的MDR等；②酶介導的MDR，包括：谷胱甘肽S轉移酶介導的MDR，拓撲異構酶II介導的MDR，蛋白激酶C介導的MDR等；③凋亡調控基因介導的MDR，包括bcl 2基因介導的MDR，p53基因等；④DNA異常修復引起的MDR。腫瘤的多藥耐藥性產生的原因比較復雜，天然藥物具有低毒、資源豐富、作用靶點多等特點。近年來，許多學者發現中藥中含有多種逆轉多藥耐藥的成份。

茯苓為多孔科真菌茯苓Poria cocos(schw)Wolf的干燥菌核，其味甘、淡、平。具有利水滲濕、健脾、寧心的功能，主治水腫尿少，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不寧等癥。茯苓中主要成分為茯苓多糖與茯苓三萜，其中茯苓多糖研究較多，而茯苓三萜主要有自由基清除功能，抗菌，抗炎，以及抗腫瘤等作用。經研究發現茯苓乙醇提取物能通過激活線粒體caspase通路抑制A549細胞的增殖，主要是通過降低線粒體膜電位，并釋放細胞色素C進入胞質溶膠，將caspase前體物裂解成caspase-9，從而達到抑制作用。并研究了茯苓乙醇提取物中一種叫土莫酸的成份，發現它是產生細胞毒性的主要成份。并指出茯苓提取物可以抑制非小細胞肺癌。且茯苓中的成份茯苓酸能觸發對吉西他濱具有耐藥性的PANC-1和MIA PaCa-2胰腺癌細胞的凋亡。通過基因對比分析發現茯苓酸能激活熱休克反應與展開蛋白反應相關基因從而引發內質網應激反應，即通過增加XBP-1s，ATF4，Hsp70，CHOP and phospho-eIF2 α的表達。同時，體內實驗顯示25mg/kg的PA能通過引起腫瘤組織部位的細胞凋亡與內質網應激相關蛋白的表達從而顯著抑制MIA PaCa-2腫瘤的生長且沒有毒性。

茯苓中含有的三萜成份較多，目前對其提取技術有一定的報道。三萜成份大多數為脂溶性成份，故有機溶劑提取方法居多。本發明用乙醇溶液提取，采用乙酸乙酯萃取，甲醇過濾后得到一種具有一定的抗腫瘤活性并逆轉腫瘤多藥耐藥性的三萜類提取物。

發明內容

本發明的目的是提供一種茯苓三萜提取物，尤其是甲醇提取物；

本發明的另一目的是提供一種茯苓三萜提取物的制備方法；

本發明還有一個目的是提供上述茯苓三萜提取物在逆轉腫瘤多藥耐藥方面的用途。

本發明的實現過程如下：

一種茯苓三萜提取物，其通過以下步驟得到：將茯苓粉碎，加入4-15倍體積的提取溶液，提取溶液濃度為50％-90％，50-110℃加熱條件下提取1-4次，每次提取時長為1-5h，抽濾，合并濾液，加入適量水分散后用乙酸乙酯進行萃取2-5次，濃縮干燥，甲醇溶解過濾，進一步濃縮，用水分散并干燥得到含有茯苓酸與去氫土莫酸的茯苓三萜提取物。