[發明專利]鹽酸可樂定快速時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條

在審

• 申請號: 201711151053.3
• 申請日: 2017-11-18
• 公開（公告）號: CN109813897A
• 公開（公告）日: 2019-05-28
• 發明（設計）人: 洪霞;杜霞;秦悅
• 申請（專利權）人: 鎮江億特生物科技發展有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及鹽酸可樂定快速時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條制備方法及其應用。該試紙條由Fusion5膜、硝酸纖維素膜和吸水紙三部分組成，通過競爭法原理，利用時間分辨熒光微球作為免疫標記物，對待測抗原進行準確快速的定量檢測。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害殘留物的檢測方法，特別是鹽酸可樂定定量檢測的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

鹽酸可樂定( Clonidine hydrochloride，分子式：C₉H₉C_l2N₃?HCl，分子量：266.56)是一種抗高血壓藥物，其藥理作用主要為通過刺激腦干α2 -腎上腺受體導致交感神經從中樞神經系統的傳出減少，從而降低外周阻力、腎血管阻力、心率以及血壓，其常見的副作用有口干、瞌睡、頭暈、鎮靜、呼吸抑制等。食用含有可樂定殘留的動物源性產品，對人體健康具有一定的危害性。農業部于2010年12月27日發布中國人民共和國農業部第1519號公告，禁止在飼料和動物飲水中使用鹽酸可樂定。

近年開始出現將鹽酸可樂定用于促進動物生長和改善酮體組成的研究，推斷其主要的作用機理為通過促進下丘腦生長腺素神經元合成和釋放生長腺素，進而調節腺垂體細胞內cAMP水平，從而調控生長激素分泌，促進生豬生長。動物研究表明在豬飼糧中添加0.5mg /kg鹽酸可樂定，能顯著提高豬的瘦肉率和眼肌面積，降低脂肪比率和背膘厚，改善豬的胴體組成。

檢測動物尿液中鹽酸可樂定的含量顯得更直接、方便，且可實現宰前檢測，為及時排除食品安全隱患，保障食品的質量安全，特開展本試驗方法研究。本發明的目的是研制一種更適合企業進行現場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

目前的免疫層析（lateral flow immunoassay，LFIA）快速檢測試紙條多以膠體金、彩色乳膠微球或者熒光素作為標記物。基于膠體金標記技術開發的快速檢測產品，存在定性或者半定量，批間差異較大等問題；彩色乳膠微球雖然批間差有所改進，但靈敏度依然較低，也只能定性或半定量；基于熒光素標記技術的免疫層析靈敏度有了較大提高，也能進行定量檢測，但是由于樣本中含有較高的熒光本底信號，且stock位移較小，會對檢測產生較大的影響。

時間分辨熒光（Time-resolved Fluorescence，TRF）是一種非同位素熒光標記物，與普通熒光相比，具有stock位移大，熒光壽命長等特點，可以有效的避免樣品中的本底熒光，以及激發光等雜散光的影響，因此相比普通熒光具有更高的靈敏度和抗干擾能力。

本發明利用Fusion5替代傳統的樣品墊、濾血膜、結合墊，將原有的四層甚至五層膜系統簡化，開發出只需要三層膜結構的快速定量免疫層析檢測試紙，不僅使生產工藝得到了簡化，而且有效的降低了產品的批內差和批間差，提高了檢測靈敏度，極具實用價值。

發明內容

本發明的目的是為了提供新型的、能快速定量檢測鹽酸可樂定的時間分辨熒光免疫層析檢測試紙條及其制備方法和應用。

本發明一方面公開了鹽酸可樂定時間分辨熒光免疫層析定量檢測試紙條，該試紙條包括Fusion5膜、硝酸纖維素膜以及吸水紙三部分。硝酸纖維素膜位于中間，Fusion5膜與吸水紙分別搭接于硝酸纖維素膜左右兩端。其中，Fusion5膜上設有加樣區和微球區，微球區上載有時間分辨熒光微球；硝酸纖維素膜上設有檢測線（T線）和質控線（C線），T線接上包被鹽酸可樂定抗原，C線包被抗兔抗體。

本發明的優點是能快速檢測出組織中鹽酸可樂定的含量。

所述鹽酸可樂定時間分辨熒光微球，包括檢測微球和質控微球，檢測微球為表面包被有鹽酸可樂定單抗的熒光微球，質控微球為表面包被有兔抗標記蛋白的熒光微球。