[發明專利]一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法

在審

• 申請號: 201711146780.0
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN108101987A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 鄭天柱
• 申請（專利權）人: 安徽未名生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C07K1/18
• 代理公司: 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙) 34119
• 代理人: 楊霞;翟攀攀

1.一種重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，包括對抗體進行陽離子交換色譜洗脫，其過程具體包括：平衡上樣后，首先采用平衡緩沖液1第一次淋洗，接著采用平衡緩沖液2第二次淋洗，接著采用平衡緩沖液2和平衡緩沖液3的混合液第三次淋洗，最后進行洗脫獲得純化抗體；其中，平衡緩沖液1為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液2為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液，平衡緩沖液3為磷酸鹽緩沖液或醋酸鹽緩沖液。

2.根據權利要求1所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第一次淋洗中，平衡緩沖液1中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為20-40mmol/L；優選地，第一次淋洗中，平衡緩沖液1的pH值為4.8-5.2。

3.根據權利要求1或2所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第一次淋洗中，平衡緩沖液1中還含有氯化鈉；優選地，所述氯化鈉的濃度為30-70mmol/L。

4.根據權利要求1-3任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第二次淋洗中，平衡緩沖液2中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為30-70mmol/L；優選地，第二次淋洗中，平衡緩沖液2的pH值為5.8-6.6。

5.根據權利要求1-4任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第三次淋洗中，平衡緩沖液2中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為30-70mmol/L；優選地，第三次淋洗中，平衡緩沖液2的pH值為5.8-6.6；優選地，第三次淋洗中，平衡緩沖液3中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為30-70mmol/L；優選地，第三次淋洗中，平衡緩沖液3的pH值為6.8-7.6。

6.根據權利要求1-5任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第三次淋洗中，平衡緩沖液2與平衡緩沖液3的體積比為3-7：2-3。

7.根據權利要求1-6任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第一次淋洗的淋洗體積不少于3個柱體積；優選地，第二次淋洗的淋洗體積不少于3個柱體積。

8.根據權利要求1-7任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，第三次淋洗采用等度洗脫的方式淋洗；優選地，第三次淋洗采用等度洗脫的方式淋洗中，洗脫體積為5-9個柱體積。

9.根據權利要求1-8任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，采用平衡緩沖液3進行洗脫獲得純化抗體；優選地，在采用平衡緩沖液3進行洗脫的過程中，平衡緩沖液3中磷酸根離子或醋酸根離子的濃度為30-70mmol/L；優選地，在采用平衡緩沖液3進行洗脫的過程中，平衡緩沖液3的pH值為6.8-7.6。

10.根據權利要求1-9任一項所述重組抗TNF-α全人源單克隆抗體的純化方法，其特征在于，洗脫的起點為采用平衡緩沖液2和平衡緩沖液3的混合液淋洗結束后；優選地，洗脫的終點為紫外檢測器檢測值達到10-40mAU/m。