[發(fā)明專利]一種組織工程化心肌補(bǔ)片及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711146739.3
• 申請(qǐng)日: 2017-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN109793934B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫廣煒;劉洋;張英;趙姍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): A61L27/40
• 分類號(hào): A61L27/40;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/20;A61L27/22
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種組織工程化心肌補(bǔ)片，其特征在于：此心肌補(bǔ)片由多種天然高分子材料制備的基底膜以及基底膜上的多層細(xì)胞所構(gòu)成；

所述天然高分子材料為分子量為5000-300000 kDa的殼聚糖、分子量為1000000-4000000 kDa的透明質(zhì)酸或膠凍強(qiáng)度為大于100 Bloom g的明膠中的兩種以上，所述多層細(xì)胞為心肌細(xì)胞、成肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的一種或兩種以上，所述細(xì)胞包括干細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化獲得的細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織工程化心肌補(bǔ)片的制備方法，其制備步驟為：

（1）制備含有殼聚糖、透明質(zhì)酸或明膠中兩種以上的成膠水溶液，之后加入交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，獲得凝膠膜，再經(jīng)過中和、清洗及干燥后即得到基底膜；

（2）在基底膜上接種細(xì)胞并培養(yǎng)，形成第一層細(xì)胞層；

（3）在第一層細(xì)胞層之上加入細(xì)胞粘附劑，之后接種細(xì)胞并培養(yǎng)，形成第二層細(xì)胞層；

（4）在第二層細(xì)胞層上再加入細(xì)胞粘附劑，接種細(xì)胞并培養(yǎng)，形成第三層細(xì)胞層；

（5）以此類推重復(fù)制備細(xì)胞層，可制備具有1-10層細(xì)胞層的心肌補(bǔ)片。

3.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述殼聚糖的分子量為5000-300000 kDa，其在成膠水溶液中的濃度為1-10%g/ml；

所述透明質(zhì)酸的分子量為1000000-4000000 kDa，其在成膠水溶液中的濃度為0.1-1%g/ml；

所述明膠包括堿性明膠、酸性明膠的一種或兩種混合；

所述明膠的膠凍強(qiáng)度為大于100 Bloom g，其在成膠水溶液中的濃度為3-15% g/ml；

所述交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、京尼平或碳二亞胺的一種或兩種以上；

所述交聯(lián)劑與成膠水溶液混合后的交聯(lián)劑濃度為0.01-3% g/ml；

所述交聯(lián)條件為溫度18-25℃，濕度50-80%。

4.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述中和過程為使用濃度0.03~0.5M的甘氨酸溶液浸泡交聯(lián)形成的凝膠膜，浸泡時(shí)間為：1~4h。

5.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述干燥的條件為溫度18-25℃，濕度20%。

6.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述基底膜包括殼聚糖、透明質(zhì)酸、明膠及交聯(lián)劑，其各自質(zhì)量百分比w/w為2.2-62.1%、0.2-6.2%、6.6-93%及0.02-18.6%。

7.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述細(xì)胞包括心肌細(xì)胞、成肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞的一種或兩種以上；

所述細(xì)胞包括干細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化獲得的細(xì)胞。

8.按照權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：

所述細(xì)胞粘附劑包括纖維蛋白、膠原、多聚賴氨酸、殼聚糖衍生物或Matrigel中的一種或兩種以上；

所述細(xì)胞粘附劑的濃度g/ml為纖維蛋白1-3%,膠原3-8%、多聚賴氨酸1-4%、殼聚糖衍生物1-3% 、Matrigel 3-10%；

細(xì)胞粘附劑的用量為100~500微升/cm²。