[發(fā)明專利]中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711145686.3
• 申請(qǐng)日: 2017-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN107918021A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王保君;湯雙雙;歐衛(wèi)軍;牛青青;陸燕子
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通伊仕生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京三聚陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11250
• 代理人: 曹治麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

急性腎損傷(Acutekidneyinjury，AKI)是由多種原因引起的，可發(fā)生在各種臨床情況下的一種復(fù)雜的腎功能減退綜合征。它可以表現(xiàn)為血肌酐水平的輕微升高，也可以表現(xiàn)為急性腎衰竭。研究發(fā)現(xiàn)，AKI的發(fā)生與病死率的增加密切相關(guān)。這就要求醫(yī)師在臨床工作中能早期診斷，最好在腎小球?yàn)V過率開始下降，或者僅有組織損傷而腎小球?yàn)V過率尚正常的階段及時(shí)發(fā)現(xiàn)并干預(yù)，以改善預(yù)后、降低病死率。血肌酐和尿量是目前AKI的診斷指標(biāo)，但受到很多因素影響，敏感性和特異性都不高。因AKI診斷滯后，常貽誤治療的最佳時(shí)期。尋求具有高敏感性、特異性、易檢測(cè)的新的生物標(biāo)志物已經(jīng)成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)之一。

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Neutrophil gelatinase-associatedlipoealin，NGAL)是迄今研究最多的AKI早期標(biāo)志物之一。它最初在人類中性粒細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，共價(jià)結(jié)合于源自中性粒細(xì)胞的明膠酶，是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族成員之一。正常情況下，NGAL只在腎臟、肝臟、胃和結(jié)腸等組織中以極低水平表達(dá)。當(dāng)炎癥發(fā)生或上皮細(xì)胞受到損傷性刺激時(shí)，NGAL才被誘導(dǎo)而發(fā)生高表達(dá)。早期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NGAL是通過微陣列基因表達(dá)譜分析檢測(cè)到的最早、最穩(wěn)定出現(xiàn)的蛋白質(zhì)之一。并且，在AKI發(fā)生不在一項(xiàng)前瞻性研究中，對(duì)635例分別患有AKI、腎前性氮質(zhì)血癥、慢性腎疾病者或腎功能正常者測(cè)量NGAL及其他多種標(biāo)志物。NGAL診斷AKI的敏感度為90％、特異度為99.5％，均優(yōu)于其他標(biāo)志物。另外，它在腎毒性(如使用順鉑、抑肽酶,冠狀動(dòng)脈造影術(shù)后)、腎血管病(如溶血尿毒綜合征)及自身免疫病(如狼瘡性腎炎)等所致的AKI中亦具早期診斷價(jià)值。目前認(rèn)為，NGAL不僅是診斷AKI敏感的標(biāo)志物，還有助于AKI與腎前性氮質(zhì)血癥、慢性腎疾病和正常腎功能的鑒別。AKI的發(fā)生與否，對(duì)膿毒癥患者病情轉(zhuǎn)歸至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，血NGAL水平在伴或不伴有AKI的全身炎性反應(yīng)綜合征、嚴(yán)重膿毒癥及膿毒癥休克患者都有升高，可能因?yàn)樗怯苫罨闹行粤＜?xì)胞所釋放的，所以多種其他疾病及其并發(fā)癥也可能使重癥患者的NGAL測(cè)值升高，故特異性不高，而尿NGAL更有利于診斷，因?yàn)樵谀摱景Y患者中，未發(fā)生AKI的患者其尿NGAL水平并不高。NGAL也是對(duì)AKI患者疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。對(duì)需要接受腎替代治療的AKI患者的研究發(fā)現(xiàn)，NGAL可作為其28d病死率的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。以上研究表明，NGAL可作為AKI早期診斷的生物標(biāo)志物。

中國(guó)專利CN104880562A)公開了用于檢測(cè)腎小管細(xì)胞損傷和早發(fā)的方法和試劑盒，該試劑盒包括與尿樣接觸的介質(zhì)，介質(zhì)上附加有對(duì)作為腎小管細(xì)胞損傷生物標(biāo)志物的NGAL特異且能夠與NGAL復(fù)合的捕獲抗體。檢測(cè)方法為：尿樣與NGAL捕獲抗體結(jié)合，形成抗體-NGAL復(fù)合物，抗體-NGAL復(fù)合物與第二抗體結(jié)合，形成第二抗體復(fù)合物，檢測(cè)第二抗體復(fù)合物中的第二抗體，第二抗體的量與尿樣中NGAL的量成正比關(guān)系。該方法檢測(cè)NGAL的檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)需要數(shù)個(gè)小時(shí)，無法滿足目前臨床上需要快速得到患者NGAL含量的要求。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)太長(zhǎng)。進(jìn)而提供一種檢測(cè)快速且靈敏度高的檢測(cè)中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白的檢測(cè)試劑盒。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白檢測(cè)試劑盒，包括

第一儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存NGAL校準(zhǔn)品；

第二儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存酶結(jié)合物工作液；

第三儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存磁珠工作液；

第四儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存清洗液；

第五儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存底物溶液；

第六儲(chǔ)液組件，用于儲(chǔ)存前處理試劑；

第七儲(chǔ)液組件，用于存儲(chǔ)NGAL質(zhì)控品。

可選的，所述磁珠工作液包括標(biāo)記有NGAL抗體的羧基磁珠；所述磁珠的粒徑為1-5μm。

可選的，所述標(biāo)記有NGAL抗體的羧基磁珠的濃度為0.1-1mg/ml。

可選的，所述酶結(jié)合物工作液包括堿性磷酸酶標(biāo)記的抗NGAL抗體。

可選的，所述堿性磷酸酶標(biāo)記的抗NGAL抗體的濃度為0.5～2μg/ml。

可選的，所述NGAL校準(zhǔn)品和所述NGAL質(zhì)控品是含有NGAL抗原的Tris緩沖液。

可選的，所述底物溶液為酶促化學(xué)發(fā)光底物溶液。