[發明專利]一種胰島素樣生長因子結合蛋白-3的定量檢測試劑盒及其非診斷目的的檢測方法

在審

• 申請號: 201711143777.3
• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN107991492A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 陳海佳;葛嘯虎;王一飛;陳婉玲;岳坤;姜交華
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 潘穎,趙青朵

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，特別涉及一種胰島素樣生長因子結合蛋白-3 的定量檢測試劑盒及其非診斷目的的檢測方法。

背景技術

矮小癥是指兒童的身高低于同性別、同年齡、同種族兒童平均身高的2個標準差，每年生長速度低于5厘米者。矮小癥是發育期兒童非常嚴重的一種疾病，與遺傳、環境、內分泌等多種因素有關，其中內分泌系統是導致矮小癥的重要因素。生長激素(Growth Hormone,GH)、胰島素樣生長因子 -1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)和胰島素樣生長因子結合蛋白-3 (IGF-binding proteins-3,IGFBP-3)共同組成了GH-IGF-1軸，其在小兒的生長發育過程中發揮重要調控作用。IGF-1是由GH刺激后分泌的，GH通過IGF-1 發揮促進人體各組織的生長功能。而IGFBP-3是IGF-1在血循環中的主要載體，可延長IGF-1在血循環中的半衰期，與GH的關系也最為密切。由于IGF-1和 IGFBP-3的分泌可以直接反應體內GH的水平，而且無晝夜節律的變化，因此研究報道認為，IGFBP-3和IGF-1可以作為矮小癥和生長激素缺乏癥(growth hormone deficienty,GHD)的診斷指標。

目前已有相關的IGFBP-3的檢測試劑盒上市，該試劑盒包括96孔板、標準品、檢測溶液A、檢測溶液B、TMB底物和濃洗滌液，實驗流程包括：

1.實驗前標準品、試劑及樣本的準備；

2.加樣(標準品及樣本)100μL，37℃孵育1小時；

3.吸棄，加檢測溶液A 100μL，37℃孵育1小時；

4.洗板3次；

5.加檢測溶液B 100μL，37℃孵育30分鐘；

6.洗板5次；

7.加TMB底物90μL，37℃孵育10-20分鐘；

8.加終止液50μL，立即450nm讀數。

但采用該試劑盒檢測IGFBP-3的濃度時存在靈敏度較差的問題。因此如何完全分離和純化IGFBP-3，從而提高IGFBP-3定量檢測試劑盒的靈敏度，是目前急需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種胰島素樣生長因子結合蛋白-3的定量檢測試劑盒及其非診斷目的的檢測方法。該IGFBP-3定量檢測試劑盒靈敏度高、特異性強、穩定性好。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種胰島素樣生長因子結合蛋白-3的定量檢測試劑盒，該定量檢測試劑盒包括：IGFBP-3單克隆抗體，IGFBP-3重組抗原標準品，生物素化的IGFBP-3多克隆抗體，酶標記的鏈霉親和素，顯色底物，終止液。

作為優選，IGFBP-3單克隆抗體的濃度為0.1～10μg/mL。

優選地，IGFBP-3單克隆抗體的濃度為0.5～4.0μg/mL。

更優選地，IGFBP-3單克隆抗體的濃度為1.0μg/mL。

作為優選，IGFBP-3重組抗原標準品的濃度為50～100ng/mL。

優選地，IGFBP-3重組抗原標準品的濃度為50～60ng/mL。

更優選地，IGFBP-3重組抗原標準品的濃度為50ng/mL。

作為優選，生物素化的IGFBP-3多克隆抗體的濃度為0.1～1.0μg/mL。

優選地，生物素化的IGFBP-3多克隆抗體的濃度為0.25～1.0μg/mL。

更優選地，生物素化的IGFBP-3多克隆抗體的濃度為0.25μg/mL。

作為優選，生物素化的IGFBP-3多克隆抗體為兔源生物素化的IGFBP-3 多克隆抗體。

作為優選，酶標記的鏈霉親和素為HRP(辣根過氧化物酶)標記的鏈霉親和素。

作為優選，顯色底物為四甲基聯苯胺。

本發明還提供了一種非診斷目的的檢測胰島素樣生長因子結合蛋白-3濃度的方法，包括如下步驟：

步驟1：將IGFBP-3單克隆抗體包被于固相載體表面，封閉；

步驟2：將IGFBP-3重組抗原標準品或樣品中的一種、生物素化的IGFBP-3 多克隆抗體與IGFBP-3單克隆抗體共同孵育；

步驟3：加入酶標記的鏈霉親和素進行孵育；

步驟4：加入顯色底物進行顯色，終止顯色后在450nm的波長下檢測OD 值；