[發(fā)明專利]一種熒光定量PCR技術(shù)防治肺結(jié)核的方法

在審

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• 申請日: 2017-11-17
• 公開（公告）號: CN109797205A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白金桃
• 申請（專利權(quán)）人: 白金桃
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1. 一種熒光定量PCR技術(shù)防治肺結(jié)核的方法，反應(yīng)體系（40μl）：4.0μl10×buffer，7.0mmol/LMg2+，200μmol/L dNTP，0.2μmol/L上下游引物，0.2μmol/L探針，4μlLDNA模板，2.5U Taq DNA聚合酶；94℃ 3min，94℃ 20s，52℃ 20s，72℃ 20s，40次循環(huán)；按照熒光定量PCR分析軟件設(shè)定基線（baseline）與閾值（threshold），以結(jié)核分枝桿菌H37Ra為參考菌株，PCR擴(kuò)增IS6110基因并克隆到質(zhì)粒載體；提取純化重組DNA，10倍系列準(zhǔn)確定量稀釋102～107Copies/ml的DNA模板，取4μl進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；呈對數(shù)增長，Ct值≤36即可判定為陽性；如擴(kuò)增曲線不規(guī)則或Ct值＞40，報告為陰性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：94℃ 3min，94℃ 20s，52℃ 20s，72℃ 20s，40次循環(huán)；按照熒光定量PCR分析軟件設(shè)定基線（baseline）與閾值（threshold），以結(jié)核分枝桿菌H37Ra為參考菌株，PCR擴(kuò)增IS6110基因并克隆到質(zhì)粒載體；提取純化重組DNA，10倍系列準(zhǔn)確定量稀釋102～107Copies/ml的DNA模板，分別取4μl進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；呈對數(shù)增長，Ct值≤36即可判定為陽性；如擴(kuò)增曲線不規(guī)則或Ct值＞40，報告為陰性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是：分別取4μl進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；呈對數(shù)增長，Ct值≤36即可判定為陽性；如擴(kuò)增曲線不規(guī)則或Ct值＞40，報告為陰性。