[發明專利]一種豬輪狀病毒VP6和VP7聯合疫苗

在審

• 申請號: 201711133245.1
• 申請日: 2017-11-16
• 公開（公告）號: CN107875379A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 陳藝燕;周佩佩
• 申請（專利權）人: 青島宏昊生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/15
• 分類號: A61K39/15;A61K39/295;A61K39/39;A61P31/14;C07K14/14;C12N15/46
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技術領域

本發明屬于疫苗制備技術領域，具體涉及一種豬輪狀病毒VP6和VP7聯合疫苗。

背景技術

豬輪狀病毒(RV)引起豬腹瀉及幼豬死亡,給養殖戶帶來巨大的經濟損失。應用疫苗免疫已經成為降低相關發病率、病死率和減輕經濟負擔的一個重要途徑。養豬場等動物養殖場是該病的其主要疫源地。目前臨床主要應用減毒苗來進行防疫,但由于輪狀病毒的多型性；以及減毒苗與野毒株基因重組,引起回復突變；養殖動物長期排毒,污染水源、食品；這些因素都給該病的防疫造成巨大困難。近年來國外深入開展了新型輪狀病毒疫苗的研究工作,并取得了巨大進展。其中主要為基因工程疫苗的研究，通過基因工程方法表達輪狀病毒的抗原，免疫動物或人，從而達到免疫保護的目的。基因工程疫苗主要包括核酸疫苗、合成膚疫苗、重組表達抗原疫苗以及輪狀病毒類病毒顆粒(VLP)疫苗等。

但在目前使用的輪狀病毒重組抗原亞單位疫苗研究中，由于輪狀病毒基因組的多樣性，導致制備的疫苗不能有效的預防不同基因背景的輪狀病毒。且輪狀病毒血清群和血清型眾多,且不同毒株的生物學特性不同,故對輪狀病毒的分離鑒定及相關特性的研究,無論是對該病毒的基礎性研究亦或是對該病的應用性研究均具有十分重要的意義。

而且，國內豬輪狀病毒疫苗的研發力度不夠，而我國豬輪狀病毒的感染率又非常高，因此國內需加快豬輪狀病毒的研發進程。國內己有哈爾濱獸醫研究所研制生產的豬傳染性胃腸炎一輪狀病毒二聯弱毒苗和福建省生物藥品廠同中國農大聯合開發的TGE-PED-RV三聯弱毒苗。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬輪狀病毒VP6和VP7聯合疫苗，能夠有效預防目前流程的豬輪狀病毒和新篩選的病毒株，從而彌補現有技術的不足。

本發明所提供的聯合疫苗，其中包括疫苗抗原蛋白和疫苗佐劑；所述的抗原蛋白為氨基酸序列為SEQ ID NO:2的VP6蛋白和氨基酸序列為SEQ ID NO:5的VP7蛋白。

所述的抗原蛋白經過了滅活處理；優選是甲醛溶液滅活；

所述的疫苗佐劑為白油Span佐劑或氫氧化鋁佐劑

編碼VP6重組表達蛋白的核苷酸片段，其一種序列為SEQ ID NO:1；

編碼VP7蛋白的核苷酸片段，其一種序列為SEQ ID NO:4。

作為優選，所述的亞單位疫苗中，VP6蛋白和VP7蛋白的含量為150-300μg/ml。

本發明在篩選獲得了新型的VP6抗原基因的基礎上，重組表達該VP6抗原蛋白，與現有的vp7蛋白一起作為抗原蛋白制成基因工程亞單位疫苗。本發明基因工程亞單位疫苗對已有的豬輪狀病毒和新篩選的輪狀病毒株具有良好的免疫效果。

附圖說明

圖1:VP6擴增產物電泳圖；

圖2：本發明篩選的VP6的blastp的結果圖；其中Query為本發明的VP6；

圖3：VP6的重組表達產物SDS電泳圖；

圖4：VP7基因擴增產物電泳圖。

具體實施方式

首先對本發明所涉及的術語解釋如下：

1、豬輪狀病毒(RV)：

輪狀病毒(Rotavirus，RV)是呼腸孤病毒科(Reoviridae)，輪狀病毒屬(Rotavirus)的成員。本屬病毒略呈圓形，由11各雙股RNA片斷組成，有雙層衣殼，直徑65～75納米。其中央為核酸構成的核心，內衣殼由32個呈放射狀排列的圓柱形殼粒組成，外衣殼為連接于殼粒末端的光滑薄膜狀結構，使該病毒形成車輪狀外觀，故命名為輪狀病毒。各種動物和人的輪狀病毒內衣殼具有共同的抗原，即群特異性抗原，可用補體結合、免疫熒光、免疫擴散和免疫電鏡檢查出來。輪狀病毒可分為A、B、C、D、E、F等6個群，其中C群和E群主要感染豬，而A群和B群也可感染豬。

2、VP6抗原基因：VP6蛋白是RV病毒的特異性抗原，位于病毒的內殼，占病毒顆粒的51％。VP6蛋白主要刺激機體產生粘膜免疫抗體，在黏膜免疫中具有非常重要的作用。

3、基因工程重組亞單位疫苗：(Subunit vaccine)又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗，是指將保護性抗原基因在原核或真核細胞中表達，并以基因產物—蛋白質或多肽制成疫苗。

下面結合實施例對本發明進行詳細的描述。

實施例1：VP6基因的篩選及序列分析