[發明專利]lncRNA?NEAT1作為分子病理診斷標志物在制備膠質瘤診斷試劑中的用途

在審

• 申請號: 201711132375.3
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN107779508A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 蔡金全;陳群;康春生;蔣傳路
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

技術領域

本發明涉及一種檢測膠質瘤的分子病理診斷標志物，特別涉及lncRNA-NEAT1作為分子病理診斷標志物在制備膠質瘤診斷試劑中的用途，還涉及一種膠質瘤診斷試劑盒，本發明屬于醫藥技術領域。

背景技術

腫瘤的分類為腫瘤的臨床治療以及科研提供了重要的方向，目前醫學界普遍采用的膠質瘤分類診斷準則(2007年世界衛生組織標準)在很大程度上基于形態學指標。該分型系統不但未能揭示腫瘤發生發展的生物學本質，且主觀性強，不一致性高達40％。

分子病理學是利用分子和遺傳學方法對腫瘤進行診斷和分類，設計和驗證對治療反應和病情發展的預測性生物標記物，不同的基因構成造成的對腫瘤的個人易感性，還有環境因素和生活方式對腫瘤發生的影響，受主觀影響較小，客觀性強。科研人員通過對膠質瘤發生發展的核心信號通路的共表達基因譜將膠質瘤分成了EGFR module型和PDGFR module型，他們之間具有顯著不同的遺傳學背景和預后。而目前尚缺乏膠質瘤組織中的分子標志物來詳盡的闡述其在膠質瘤分子病理學診斷的作用。

因此，尋找和發現新的膠質瘤中新的分子標志分子彌補EGFR在分子病理學診斷的不足以提高膠質瘤的診斷水平，是膠質瘤防治研究的重要內容。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種新的膠質瘤分子病理診斷標志物；

本發明的目的之二是建立一種膠質瘤診斷試劑盒及其診斷方法，以克服傳統的檢測膠質瘤相關的lncRNA的原位雜交技術具有價格昂貴，實驗周期較長以及靈敏度較差的缺點以滿足大規模的實驗以及臨床應用的需要。

為了達到上述目的，本發明所采用了以下技術手段：

本發明發明人利用膠質瘤公開數據庫篩選與EGFR module和PDGFR module型膠質瘤相關的lncRNA并在臨床樣本中進行了進一步驗證，結果發現lncRNA-NEAT1在EGFR module型膠質瘤組織中高表達。

在上述研究的基礎上，本發明提出了lncRNA-NEAT1作為分子病理診斷標志物在制備膠質瘤診斷試劑中的用途。

其中，優選的，所述的試劑用于區分EGFR module型膠質瘤以及PDGFR module型膠質瘤。

進一步的，本發明還提出了一種膠質瘤診斷試劑盒，所述的試劑盒含有用于擴增lncRNA-NEAT1的引物對，所述的引物對由上游引物和下游引物組成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，優選的，所述的試劑盒還包括反轉錄PCR反應液、SYBR Premix Ex TaqTM熒光染料PCR反應液、MgCl₂、dNTP、RNasin、隨機引物、反轉錄酶以及無RNA酶水。

使用本發明所述的試劑盒用于EGFR module型膠質瘤診斷時，按照以下步驟進行：

(1)提取待測樣本的總RNA

(2)反轉錄

對步驟(1)提取得到的總RNA進行反轉錄得到cDNA模板；

(3)熒光定量PCR檢測

以步驟(2)得到的cDNA為模板，使用所述的引物對進行熒光定量PCR擴增，熒光定量PCR體系為：

熒光定量PCR條件為：95℃30s；95℃5s，60℃15s，共進行44個循環，72℃30s，4℃保存；

(4)結果判定

截斷值＝1.52。

其中，優選的，所述樣本為膠質瘤新鮮病理組織。

相較于現有技術，本發明的有益效果在于：

1、本發明提供了一種新的膠質瘤分子病理診斷標志物，該標志物可用于區分EGFR module型膠質瘤以及PDGFR module型膠質瘤，從而為膠質瘤的治療提供依據和方向。

2、本發明提供了一種膠質瘤的診斷試劑盒，并建立了一種診斷膠質瘤的方法，該方法通過PCR方法進行，相較于傳統方法，具有成本低、時間段、靈敏度高等優點，能夠滿足大規模的實驗以及臨床應用的需要。

附圖說明

圖1為6個lncRNA在膠質瘤組織中的表達檢測；

圖2為利用原位雜交檢測NEAT1在PDGFR module與EGFR module病人膠質瘤組織中lncRNA-NEAT1的表達水平；

圖3為在CGGA，GSE16011，Rembrandt和TCGA數據庫中NEAT1在EGFR module中的受試者工作特征曲線(ROC)；