[發明專利]真菌甲基化反應中胞內2,4,6-三氯苯甲醚和2,4,6-三氯苯酚的提取方法

有效

• 申請號: 201711129683.0
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN107879905B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 白秀芝;李海普;張婷;楊兆光
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C07C41/34
• 分類號: C07C41/34;C07C43/225;C07C37/70;C07C39/32
• 代理公司: 北京漢昊知識產權代理事務所(普通合伙) 11370
• 代理人: 馮譜

1.真菌甲基化反應中胞內2,4,6-三氯苯甲醚和2,4,6-三氯苯酚的提取方法，包括真菌細胞壁破壁和提取，其特征在于，用布氏漏斗將真菌與培養液分離后，再用超純水沖洗真菌表面；將沖洗后的真菌抽濾至近干，取0.2g的真菌，經破壁處理后，在4℃，12000rpm下離心10min；上清液用于胞內溶解態化合物的測定；細胞殘片用一定量超純水沖洗后，用30mL乙醚提取，合并提取液，在50mL的旋轉蒸發瓶中旋蒸至干，用1mL甲醇定容；取100μL的甲醇定容的樣品置于5mL水中，用LDS-DLLME-GC/ECD法測定分析，這部分的化合物為胞內結合態；所述真菌細胞壁破壁采用反復凍融破壁；

所述反復凍融的細胞裂解液組成為：2％的十六烷基三甲基溴化銨，1.4mol L-1的NaCl，20m mol L-1的乙二胺四乙酸，20mmol L-1的Tris-HCl，pH調至8.0。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述反復凍融是：將0.2g的真菌樣品置于5mL的凍存管中，加入3mL細胞裂解液，搖勻；然后，將凍存管在液氮罐中冷凍5min，取出，放入37℃的水浴中5min，如此反復操作10-12個循環。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述真菌為花斑曲霉或者米曲霉。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述的真菌為絲狀真菌。