[發明專利]一種能夠特異性抑制ZBED1基因的siRNA的構建方法及其應用

在審

• 申請號: 201711126475.5
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN109777800A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 宋鑫;李瑞蕾;劉敏;孟旭東
• 申請（專利權）人: 信雅生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 上海宣宜專利代理事務所(普通合伙) 31288
• 代理人: 劉君

本發明提供了一種新型人轉錄因子——鋅指BED型包涵子1在臨床肺癌中表達情況及該基因在肺癌中的作用，涉及分子生物學領域及腫瘤學領域。鋅指BED型包涵子1(zinc finger,BED?type containing 1)的國際命名為ZBED1，基因ID號為9198?；谠摶蛐蛄兴兄频膕iRNA可能對肺癌的靶向治療具有十分重要的應用價值。利用小干擾RNA阻斷肺癌細胞中ZBED1蛋白表達，可以抑制肺癌細胞的增殖、克隆形成能力及細胞周期進展。本發明公開了能特異性阻斷ZBED1基因的小干擾RNA的制備方法，以及該小干擾RNA對肺癌細胞的作用。

技術領域

本發明屬于分子生物學及腫瘤學領域，具體的涉及到一種能夠特異性抑制ZBED1基因的siRNA的構建方法及其應用。

背景技術

鋅指BED型包涵子1(zinc finger,BED-type containing 1，ZBED1)又名DNA復制相關元素結合因子，屬于鋅指蛋白ZBED家族，由694個氨基酸殘基組成，分子量約78kDa，其編碼蛋白被認為是一種調控DNA復制、染色質結構重塑、蛋白質合成、細胞周期等的關鍵轉錄因子。令人感興趣的是，ZBED1在腫瘤中的研究至今未見報道。前期工作發現采用免疫組化檢測ZBED1在人肺癌組織高表達，并且與腫瘤T分期顯著相關。由此提示，ZBED1是人肺癌特異高表達基因，可能在肺癌生長中發揮重要作用。

發明內容

本發明的目的在于針對ZBED1基因的研究現狀，闡明其在肺癌中的表達情況，提出能夠特異性抑制ZBED1基因的siRNA的構建方法及其應用。

本發明的目的通過以下技術方案實現。

1.檢測ZBED1蛋白在臨床肺癌中的表達情況，包括以下步驟：

(1)臨床肺癌組織標本的收集及標本信息：收集2009年1月至2016年6月于云南省腫瘤醫院胸外科行肺原發腫瘤根治性切除術的122例Ⅰ—ⅢA期肺腺癌患者的癌組織和癌旁肺組織標本。其中，男性63例，女性59例；患者平均年齡54.4歲，年齡范圍27至78歲；

(2)蘇木素—伊紅(HE)染色進行病理診斷；

(3)免疫組化檢測ZBED1蛋白在臨床肺癌癌組織和癌旁組織中的表達情況；

(4)統計分析ZBED1蛋白在臨床肺癌癌組織和癌旁組織中的表達差異；

2.一種能夠特異性抑制ZBED1基因的siRNA的構建方法，包括以下步驟：

(1)利用NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene)數據庫，獲得人ZBED1基因的轉錄本及編碼(CDS)區信息(轉錄本1：NM_001171136，CDS區：1283-2367，具體序列見序列表)；

(2)根據siRNA序列設計原則，針對人ZBED1基因的編碼區，設計2個能特異性敲減人ZEBD1基因的靶序列；