[發(fā)明專利]一種基于細(xì)胞計(jì)數(shù)板的染脫色方法

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• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN107884250A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱耀輝;陳坤
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳博大博聚科技有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域常用的染脫色方法，具體涉及一種基于細(xì)胞計(jì)數(shù)板的染脫色方法。

背景技術(shù)

如圖1所示，目前，為了更好的識別細(xì)胞或細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)人員會(huì)對細(xì)胞或細(xì)菌進(jìn)行染色和脫色處理(以下簡稱染脫色)。實(shí)驗(yàn)室常用的染脫色步驟如下：

1、涂片：

1)涂片目的：

a)將標(biāo)本攤成極薄的液膜，增大與載玻片的接觸面積，防止標(biāo)本脫落；

b)增大染料的接觸面積，便于染色；

c)方便顯微鏡觀察。

2)涂片方法：

a)細(xì)菌涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水充分混勻,滴到載玻片上，涂成極薄的菌膜。或直接將標(biāo)本涂敷到載玻片上；

b)細(xì)胞涂片：將細(xì)胞懸液滴到載玻片上，離心攤片或涂成極薄的液膜；

2、干燥：可自然晾干,或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?但不能直接在火焰上烘烤；

3、固定：手執(zhí)玻片一端,有液膜的一面朝上,迅速通過火焰2-3次(用手指觸涂片反面,以不燙手為宜)；

4、染色：加適量(以蓋滿液膜為度)染色液A,染N分鐘；

5、清洗：用水沖洗至流下的水中無染色液的顏色時(shí)為止；

如需復(fù)染，重復(fù)染色和清洗步驟；

6、干燥：可自然晾干,或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓桑?/p>

7、蓋片：加蓋玻片(防止鏡檢時(shí)污染顯微鏡物鏡)或樹脂密封；

8、鏡檢：顯微鏡觀察。

此染脫色方法的優(yōu)點(diǎn)：

1、不依賴實(shí)驗(yàn)設(shè)備，只需要酒精燈，無需借助其他儀器設(shè)備可完全手工操作；

2、方便快捷：

此染脫色方法存在的問題：

1、標(biāo)本存在固定不牢固而脫落的風(fēng)險(xiǎn)；

2、標(biāo)本存在被清洗時(shí)清洗脫落的風(fēng)險(xiǎn)；

3、涂片的厚度不均勻，造成鏡檢時(shí)圖像明暗不均勻，圖像模糊；

4、廢液收集難度大，高傳染性標(biāo)本不易控制生物安全性；

5、高度依賴實(shí)驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)；

6、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不高，從標(biāo)本的取樣、染液和洗脫液的用量、涂片的面積及厚度，到實(shí)驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)，均對結(jié)果造成影響；

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種基于細(xì)胞計(jì)數(shù)板的染脫色方法，采用標(biāo)本在離心管(可根據(jù)標(biāo)本體積選擇合適容量的離心管)中染脫色，每次離心去除廢液，廢液收集消毒后棄去，染色后樣品定量加入一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，樹脂密封進(jìn)樣孔，鏡檢。

該方法考慮到標(biāo)本定量、結(jié)果重復(fù)性、生物安全性，同時(shí)具有操作簡便、易行。增加了定量移液器和離心機(jī)的使用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種基于細(xì)胞計(jì)數(shù)板的染脫色方法，具體操作步驟如下：

步驟一、標(biāo)本收集：可根據(jù)標(biāo)本體積選擇合適容量的離心管收集標(biāo)本；

步驟二、染色：用移液器定量加染色液A，X ul到離心管中，染N分鐘；

步驟三、一次離心：根據(jù)標(biāo)本種類選擇合適的離心力和離心時(shí)間；

步驟四、清洗：棄染色液上清，用移液器定量加清洗液到離心管中，混勻；

步驟五、二次離心：根據(jù)標(biāo)本種類選擇合適的離心力和離心時(shí)間；

步驟六、待檢標(biāo)本：棄清洗液上清，用移液器定量加水，根據(jù)標(biāo)本不同，選擇合適的緩沖液，混勻，懸浮待檢標(biāo)本；

步驟七、如需復(fù)染，重復(fù)染色、一次離心以及清洗步驟；

步驟八、制片：將染色后的待檢標(biāo)本用移液器定量加入到一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板；染脫色后的標(biāo)本是以懸浮狀態(tài)被密封到0.1mm高度的一次性計(jì)數(shù)板腔體窄縫中，樣品的面積和體積固定，便于濃度定量；

步驟九、封口：使用樹脂將一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板的進(jìn)出樣品口密封；

步驟十、鏡檢：標(biāo)本進(jìn)入一次性計(jì)數(shù)板腔體后，在重力作用下，標(biāo)本經(jīng)過靜置，能很好的沉降到一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板的底部，鏡檢時(shí)，標(biāo)本的焦平面固定，便于觀察；

步驟十一、銷毀：使用后的一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板可存放一定時(shí)間，最終按生物安全標(biāo)準(zhǔn)焚燒徹底銷毀；

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)板有單孔、雙孔、十孔，樣品腔高度0.1mm，樣品腔兩端有進(jìn)樣孔和出樣孔，或者使用玻璃的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、尿沉渣計(jì)數(shù)板。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，染色劑和脫色劑可以多次更換。

本發(fā)明的有益效果是：

1、標(biāo)本不需要固定到載玻片上；

2、染脫色過程不是在載玻片上完成，而是在閉合的離心管中進(jìn)行；