[發明專利]一種基于胃腸消化的大分子多肽制備原位實時監測方法

有效

• 申請號: 201711111354.3
• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN108107018B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 馬海樂;黃姍芬;李云亮;阮思煜;王禹程;楊雪;陸峰;黃暢
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/359
• 分類號: G01N21/359
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種牛奶大分子多肽制備原位實時監測方法，其特征在于按照下述步驟進行：

(1)取蛋白濃度為34g/L和30g/L的牛奶于夾層燒杯中，在50℃恒溫攪拌平衡10min，用1mol/L的NaOH調節到pH為7.0；隨后加入5％E/S的中性蛋白酶進行酶解，整個酶解過程中pH保持恒定，酶解時間90min，每間隔2min取樣，同時采集光譜信息，取樣后迅速沸水浴滅酶，冷卻進行胃腸模擬消化實驗；用3mol/L的HCl調節pH為1.60；隨后加入2％E/S的胃蛋白酶，酶解2h，整個酶解過程中pH保持在1.5-2.0之間；胃蛋白酶酶解結束后，用1mol/L的NaOH調節到pH為8.0，隨后加入2％E/S胰酶，酶解4h，整個酶解過程中pH保持恒定，酶解結束后取樣，取樣后迅速用沸水浴滅酶10min，冷卻后10000g離心10min，收集上清液儲存于4℃待測；共計90個樣品；

(3)測定牛奶酶解產物經過胃腸蛋白酶消化后的降血壓活性；

(4)牛奶酶解過程中原位實時光譜的采集，整個系統工作時，在夾層燒杯中進行牛奶的酶解，開啟自動滴定儀、磁力攪拌器、超級恒溫箱；將浸入式光纖探頭置于牛奶中并固定；由鹵鎢燈光源將光源傳入浸入式光纖探頭，在酶解反應過程中采集到的相應光譜反映在微小型近紅外光譜儀中，最終通過信息采集系統將光譜信息采集并存儲；以InGaAs檢測器采集900-2500nm光譜，采集光譜時以50℃蒸餾水為背景，采用透反射方式；光程4mm；掃描次數為16次，分辨率6.4nm，共含90個變量；每個樣品連續采集3次光譜，取其平均值作為該樣品的原始光譜；

(5)牛奶酶解過程中原位實時光譜的預處理；采用多項式卷積平滑預處理方法對酶解過程中采集的原始光譜進行預處理；

(6)校正模型的建立；將90個樣品的光譜用多項式卷積平滑預處理方法進行預處理，分成校正集和預測集兩個部分，其中校正集為70個樣品，預測集為20個樣品；采用偏最小二乘算法建立酶解過程中牛奶水解度及其酶解產物經過胃腸消化后的降血壓活性的定量模型，包括校正模型和預測模型；

(7)酶解過程的預測；蛋白濃度34g/L和30g/L的牛奶，按照步驟(4)的方法采集光譜，按照步驟(1)、步驟(2)和步驟(3)的方法進行酶解；將采集的光譜帶入步驟(6)中所建立的預測模型中，對牛奶水解度及其酶解產物經過胃腸消化后的降血壓活性進行預測，并比較其預測值和實測值的殘差；殘差值小于實測值5％認為該模型預測準確。