[發(fā)明專利]一種制備玉米醇溶蛋白降血壓肽的方法

有效

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• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN108003230B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海樂;黃姍芬;李云亮;阮思煜;王禹程;楊雪;陸峰;黃暢
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: C07K14/425
• 分類號: C07K14/425;C12P21/06
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本發(fā)明公開了一種制備玉米醇溶蛋白降血壓肽的方法，涉及農(nóng)副產(chǎn)品深加工領(lǐng)域。具體涉及一種在低濃度的乙醇環(huán)境下，依次采用胰酶和胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白制備高活性降血壓肽的方法。本發(fā)明避免了玉米醇溶蛋白在水溶環(huán)境下溶解性差，酶解效率低的問題。在低濃度乙醇環(huán)境下，胰酶和胃蛋白酶具有較高活性，同時玉米醇溶蛋白溶解性很好，從而顯著提高了酶解效率，大幅提高酶解產(chǎn)物降血壓活性，降低制備成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)副產(chǎn)品深加工領(lǐng)域，具體涉及在醇溶環(huán)境下，由于胰酶和胃蛋白酶對乙醇有較好耐受性，依次酶解玉米醇溶蛋白制備降血壓肽的方法。

背景技術(shù)

玉米醇溶蛋白資源豐富。我國是玉米生產(chǎn)大國，2014年玉米年產(chǎn)量2.15億噸。玉米淀粉生產(chǎn)過程中的主要副產(chǎn)物為玉米蛋白粉，其中醇溶蛋白占50％～60％。玉米醇溶蛋白營養(yǎng)成分豐富，且不含有毒有害物質(zhì)，目前利用玉米醇溶蛋白的成膜性、抗氧化性，被廣泛應(yīng)用于包裝、保鮮等領(lǐng)域，但是其高值化利用度低。近年來研究表明玉米醇溶蛋白是制備降血壓肽非常理想的蛋白資源，且大多采用酶解法制備玉米醇溶蛋白降血壓肽。但是，玉米醇溶蛋白富含谷氨酸、亮氨酸、脯氨酸和苯丙氨酸等疏水性氨基酸，易溶于乙醇溶液，難溶于水，即使是水解能力極強(qiáng)的堿性蛋白酶也很難“進(jìn)攻”其酶切位點(diǎn)，不僅酶解效率低，而且堿性蛋白酶價(jià)格昂貴，提高了制備成本。

胰酶(含胰蛋白酶和糜蛋白酶等)和胃蛋白酶是動物體內(nèi)重要的消化性蛋白酶，其具有較強(qiáng)的專一性，其中胰蛋白酶對堿性氨基酸組成的肽鍵具有高度專一性，糜蛋白酶能專一水解Tyr、Trp和Phe羧基端肽鍵。賈俊強(qiáng)研究的降血壓肽構(gòu)效關(guān)系表明酶解制備降血壓肽時，首選酶切位點(diǎn)在Tyr、Pro、Trp、Phe和Leu羧基端的蛋白酶(賈俊強(qiáng).超聲對酶法制備小麥胚芽降血壓肽的影響及其作用機(jī)理[D].江蘇大學(xué)，2009.)。其中胃蛋白酶能夠優(yōu)先斷裂由色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸或亮氨酸等疏水性氨基酸形成的肽鍵。胰酶和胃蛋白酶的提取工藝簡單，不涉及純化工藝，且價(jià)格低廉。在水溶環(huán)境下，玉米醇溶蛋白溶解性差，胃蛋白酶、胰酶很難接觸到其酶切位點(diǎn)，且其水解能力不如堿性蛋白酶，但是，胰酶和胃蛋白酶對乙醇具有很強(qiáng)的耐受性，研究其在醇溶液中酶解玉米醇溶蛋白制備生物活性肽，還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服已有技術(shù)存在的問題，提供一種在醇溶環(huán)境下，利用胃腸消化酶(胃蛋白酶和胰酶)酶解玉米醇溶蛋白制備降血壓肽的方法。具體為在低濃度的乙醇環(huán)境中，依次利用胰酶、胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白，制備高活性的降血壓肽。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，其具體的技術(shù)方案如下：

一種制備玉米醇溶蛋白降血壓肽的方法，按照下述步驟進(jìn)行：

將玉米醇溶蛋白用60％-70％的乙醇溶解后，調(diào)節(jié)溫度至35～50℃，加入含有胰酶的水溶液進(jìn)行酶解，使得乙醇終濃度降為15～20％，蛋白終濃度1.5％(m/v)胰酶添加量3％～5％(E/S)，采用NaOH溶液維持pH為7.5～8.5，酶解3～6h后結(jié)束，加入HCl調(diào)節(jié)pH為1.5～2.0，pH穩(wěn)定后，加入胃蛋白酶進(jìn)行酶解，胃蛋白酶添加量3％～5％(E/S)，維持pH為1.5～2.0，酶解2～4h后，調(diào)pH為堿性終止反應(yīng)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，補(bǔ)水后滅酶，離心，收集上清液，干燥。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：在醇溶環(huán)境下，用胰酶和胃蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白制備降血壓肽的優(yōu)勢，一方面，玉米醇溶蛋白易溶于60％的乙醇，將該體系緩慢加水稀釋至15～20％乙醇溶液，玉米醇溶蛋白在短時間內(nèi)不會聚集析出，有效增加酶與蛋白的接觸面積，更有利于酶“進(jìn)攻”其酶切位點(diǎn)；另一方面，胰酶和胃蛋白酶對乙醇具有很好的耐受性，胰酶和胃蛋白酶是常用的制備降血壓肽的蛋白酶，且價(jià)格便宜。本發(fā)明在蛋白酶活性較高的條件下，不僅有效提高玉米醇溶蛋白的溶解性，而且有效提高酶解產(chǎn)物降血壓肽的活性，從而有效降低生產(chǎn)成本。

下面通過實(shí)施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

具體實(shí)施方式