[發(fā)明專利]一種玉米醇溶蛋白抗炎多肽及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711111330.8
• 申請(qǐng)日: 2017-11-13
• 公開（公告）號(hào): CN107868124B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬海樂(lè);梁秋芳;任曉鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/425
• 分類號(hào): C07K14/425;C12P21/06;A23L33/18
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.玉米醇溶蛋白抗炎多肽，其特征在于其氨基酸序列為：

Phe-Leu-Pro-Pro-Val-Thr-Ser-Met-Gly。

2.一種玉米醇溶蛋白抗炎多肽的制備方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行：

(1)超聲預(yù)處理玉米醇溶蛋白：定量稱取玉米醇溶蛋白，加入蒸餾水配置成1～5％(m/v)懸濁液，進(jìn)行超聲波處理；

(2)玉米醇溶蛋白酶解物制備：調(diào)節(jié)上述蛋白溶液pH 7.5～8.0，加入蛋白酶，酶與底物的比例為1:20～50(w/w)，均勻混合，酶解溫度50～70℃，酶解時(shí)間2～4h；酶解結(jié)束后調(diào)節(jié)混合液pH為7.0，并在沸水浴中滅酶10min，離心獲得上清液，脫鹽、濃縮、冷凍干燥成粉末；所述的蛋白酶為嗜熱蛋白酶；

(3)模擬胃腸道消化：配制人工胃液；在37℃下，將步驟(2)制備得到的玉米醇溶蛋白酶解物與人工胃液以1:20～50混合，在震蕩頻率為120～180rpm條件下模擬胃消化2～4h；用NaOH調(diào)節(jié)pH為6.8，以1:100(w/v)加入胰酶至混合液，繼續(xù)酶解4～6h；沸水浴滅酶10min，離心取上清液，脫鹽、濃縮、冷凍干燥成粉末；

(4)Caco-2模擬小腸上皮細(xì)胞吸收：構(gòu)建Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型，將步驟(3)制備得到的玉米醇溶蛋白多肽消化產(chǎn)物配制成20mg/ml，加入到Caco-2細(xì)胞的絨毛面腸腔側(cè)，0.5～4h后，收集基底面腸內(nèi)壁側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)的玉米醇溶蛋白肽，脫鹽、冷凍干燥；

(5)采用UPLC-MC鑒定及分析多肽序列：對(duì)步驟(3)制備得到的玉米醇溶蛋白多肽消化產(chǎn)物、步驟(4)經(jīng)過(guò)Caco-2細(xì)胞吸收的玉米多肽進(jìn)行鑒定及多肽序列分析，篩選出離子強(qiáng)度強(qiáng)，在吸收過(guò)程中未被分解的多肽；分析得到玉米醇溶蛋白抗炎多肽，其氨基酸序列為：Phe-Leu-Pro-Pro-Val-Thr-Ser-Met-Gly；

(6)多肽的合成以及活性驗(yàn)證

對(duì)步驟(5)鑒定得到的玉米醇溶蛋白抗炎多肽進(jìn)行人工合成，并驗(yàn)證其抗炎活性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種玉米醇溶蛋白抗炎多肽的制備方法，其特征在于其中步驟(1)所述的超聲波處理工藝條件如下：掃頻超聲處理，超聲處理時(shí)間10-30min，間歇比10s/3s，溫度25℃；超聲波處理頻率及頻率組合為：?jiǎn)晤l：20kHz、28kHz、40kHz之一；或者雙頻：20/28kHz、20/40kHz、28/40kHz之一；或者三頻：20/28/40kHz。