[發明專利]一種適用于核酸轉染的自組裝納米制劑及其制備與應用

有效

• 申請號: 201711110814.0
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN107937443B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 于倩茹;彭金良;徐宇虹
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C08B37/16;C08G81/00;C08G65/46;C08G65/333;C08G73/02
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

本發明屬于核酸藥物載體技術領域，具體涉及一種適用于核酸轉染的自組裝納米制劑及其制備與應用。所述自組裝納米制劑，包括組分：β?環糊精修飾的聚乙烯亞胺、金剛烷封端的聚乙二醇和金剛烷修飾的聚酰胺?胺。本發明首次發現，當β?環糊精修飾的聚乙烯亞胺中的聚乙烯亞胺采用低分子量的聚乙烯亞胺，所形成的自組裝納米制劑，對于核酸分子具有非常好的轉染效果。

技術領域

本發明屬于核酸藥物載體技術領域，具體涉及一種適用于核酸轉染的自組裝納米制劑及其制備與應用。

背景技術

惡性腫瘤作為死亡的重要原因，正在不斷威脅著人類的身體健康，已經成為常見病、多發病。惡性腫瘤死亡率已超過心血管疾病，與病毒性疾病、老年病并稱為“現代醫學的三大挑戰”。對于惡性腫瘤，我們依然無法攻克，尚無完備的治療手段，只能通過手術切除、化學治療、放射治療、和免疫治療等常規方法。但是隨著人類對腫瘤疾病的不斷深入了解，近年來在免疫治療領域取得了突破。

腫瘤免疫治療在近期以來備受關注，是腫瘤治療領域的焦點和熱點。免疫療法是應用免疫學原理和方法，提高腫瘤細胞的免疫原性和對效應細胞殺傷的敏感性，激發和增強機體抗腫瘤免疫應答，并應用免疫細胞和效應分子輸注宿主體內，協同機體免疫系統殺傷腫瘤、抑制腫瘤生長。腫瘤免疫治療由于其卓越的療效和創腫瘤免疫治療有望成為繼手術，化療，放療，靶向治療后腫瘤治療領域的一場革新。近年來，在免疫治療領域，通過基因工程改良包括T細胞在內的淋巴細胞作為“活的藥物”來消滅癌細胞是癌癥療法的一個新方向。如T細胞療法的具體過程主要分為九個步驟：(1)將白細胞從患者的血液中分離出來。(2)通過逆流離心淘洗或其它方法富集淋巴細胞。(3)富集的淋巴細胞在體外培養環境中接受特定抗原刺激。(4)同時，通過載體導入編碼CAR或TCR的基因片段。(5)這些淋巴細胞在生物反應器中分裂增殖。(6)當淋巴細胞達到足夠數量后會經過清洗去除沒有表達預訂CAR或TCR的T細胞。(7)濃縮后的細胞樣本會接受質量檢查。(8)然后冰凍成為最終產品運送到診所。(9)診所的醫生將產品解凍，注回患者體內。在整個治療過程中其中最為關鍵的步驟就是通過載體導入基因片段。

現階段較為常見的淋巴細胞轉染的方法有病毒介導法，普通電穿孔技術，非病毒載體轉染法等。病毒介導法耗時耗力，存在生物安全隱患及高成本等缺點，病毒感染引起的不可預期的免疫反應等缺陷不可被忽視。普通電穿孔技術對免疫相關的原代細胞通常存在轉染效率低的問題，也無法進行下游實驗。所以安全性高、副作用小、生產成木低的非病毒載體越來越受到人們的青睞，但由于T細胞是懸浮細胞，并且由于其自身的一些生物學性質，目前還沒有有效的非病毒載體用于將基因片段高效的運送至T細胞內。

發明內容

為了克服現有技術中所存在的問題，本發明的目的在于提供一種適用于核酸轉染的自組裝納米制劑及其制備與應用。

為了實現上述目的以及其他相關目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種自組裝納米制劑，包括組分：β-環糊精修飾的聚乙烯亞胺、金剛烷封端的聚乙二醇和金剛烷修飾的聚酰胺-胺。

優選地，所述β-環糊精修飾的聚乙烯亞胺可以是接枝有β-環糊精的聚乙烯亞胺。

優選地，接枝前的聚乙烯亞胺為低分子量的聚乙烯亞胺。

進一步優選地，接枝前的聚乙烯亞胺的分子量范圍可以是400～2000。更優選地，接枝前的聚乙烯亞胺的分子量范圍可以是600～1800。再優選地，接枝前的聚乙烯亞胺的分子量范圍可以是800。

優選地，所述接枝有β-環糊精的聚乙烯亞胺中，每條聚乙烯亞胺長鏈上接枝有一個及一個以上β-環糊精分子。進一步地，每條聚乙烯亞胺長鏈上接枝有4～7個β-環糊精分子。

優選地，所述金剛烷封端的聚乙二醇中，金剛烷可通過酰胺鍵連接到聚乙二醇的端部。

優選地，未封端前的聚乙二醇的分子量可以是2000～5000。