[發(fā)明專利]豬輪狀病毒毒株及其制備的滅活疫苗和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711107884.0
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN107988170B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設計）人: 王國輝;董雅文;賈小營;張微;楊澤斌;李長艷;朱俊輝;于志剛;王英祺;廉唯;王石;何玉友
• 申請（專利權）人: 吉林正業(yè)生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/15;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發(fā)明公開了一株豬輪狀病毒毒株及其制備的滅活疫苗和應用。本發(fā)明首先公開了一株分離的豬輪狀病毒zyh25株，其微生物保藏編號為CGMCC No.13792。本發(fā)明進一步公開了所述豬輪狀病毒zyh25株在制備防治豬輪狀病毒病的疫苗中的應用。本發(fā)明還公開了一種防治豬輪狀病毒病的疫苗組合物，包括：預防或治療上有效量的滅活的所述豬輪狀病毒zyh25株和藥學上可接受的佐劑。本發(fā)明所分離的豬輪狀病毒zyh25株作為疫苗株具有良好的免疫原性，免疫動物后能產生較高的抗體水平，且能夠耐受強毒株攻擊。本發(fā)明所述豬輪狀病毒zyh25株能夠進行無血清全懸浮連續(xù)生產，制備的滅活疫苗具有生產成本低、產品批間差異小等優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及一株分離的豬輪狀病毒毒株，還涉及所述豬輪狀病毒毒株制備的滅活疫苗及在防治豬輪狀病毒感染中的應用，屬于豬輪狀病毒毒株的分離及應用領域。

背景技術

豬輪狀病毒(Porcine Rota Virus，PoRV)病是由輪狀病毒感染引起的一種仔豬腹瀉性疾病。輪狀病毒種類很多，具有不同的血清型和基因型，且感染的宿主譜很廣，人、雞、豬、牛、馬等動物的幼齡階段皆有感染發(fā)生，主要臨床表現(xiàn)為腹瀉，并能與其他病原微生物發(fā)生協(xié)同作用，造成繼發(fā)感染，從而引起豬群的高發(fā)病率和致死率，對各國養(yǎng)豬業(yè)的危害很大。

預防豬輪狀病毒感染發(fā)生與傳播的最有效手段是疫苗接種。目前，市售的豬輪狀病毒疫苗絕大多數(shù)為轉瓶培養(yǎng)工藝制備的活疫苗，相對于無血清全懸浮培養(yǎng)工藝而言，其具有用工人數(shù)多、生產成本高、培養(yǎng)過程無法實時監(jiān)測、產品批次之間差異較大、副反應大、安全性差等諸多缺點。因此，分離能夠進行無血清全懸浮培養(yǎng)的豬輪狀病毒毒株，對于有效預防豬輪狀病毒的感染具有重要意義。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的第一個技術問題是提供一株分離的豬輪狀病毒毒株；

本發(fā)明所要解決的第二個技術問題是提供所述豬輪狀病毒毒株制備的滅活疫苗及其在防治豬輪狀病毒病中的應用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明所采取的技術方案是：

本發(fā)明從中國吉林省某養(yǎng)豬場疑似豬輪狀病毒感染的豬群中，分離得到一株豬輪狀病毒毒株。病毒分離后，經在Marc-145細胞上進行3次蝕斑克隆純化，得到一株免疫原性良好的疫苗株。血清學鑒定結果表明，該病毒只能被PoRV陽性血清特異性抑制，因此鑒定該病毒為豬輪狀病毒，并命名為zyh25株。RT-PCR鑒定結果表明，用PoRV VP7基因的特異性引物對分離的病毒細胞培養(yǎng)物進行RT-PCR擴增，得到1062bp的目的基因片段，與預期結果相符。

本發(fā)明測定了分離的病毒zyh25株的病毒半數(shù)感染量(TCID₅₀)，試驗中對轉瓶培養(yǎng)工藝和無血清全懸浮培養(yǎng)工藝進行了同步試驗，以比較不同培養(yǎng)方式繁殖的病毒液在毒力方面的差異。測定結果顯示，病毒zyh25株經Marc-145細胞轉瓶培養(yǎng)、無血清全懸浮培養(yǎng)的病毒半數(shù)感染量分別為10^7.0TCID₅₀/ml、10^8.0TCID₅₀/ml。可見，單位體積內無血清全懸浮培養(yǎng)工藝所產的病毒含量更高。因此，本發(fā)明所分離的病毒zyh25株為能夠進行無血清全懸浮連續(xù)生產的豬輪狀病毒毒株。病毒zyh25株經轉瓶工藝、懸浮工藝所制備的病毒液均能感染仔豬，造成仔豬的輪狀病毒腹瀉，對仔豬的最小感染劑量均為10^5.0TCID₅₀/ml；不同生產工藝制備的滅活液對仔豬的最小免疫劑量都是10^5.0TCID₅₀/ml。測定結果顯示，本發(fā)明所分離的病毒zyh25株為致病性豬輪狀病毒。

本發(fā)明將分離的豬輪狀病毒zyh25株提交專利認可的機構進行保藏，其微生物保藏編號為：CGMCC No.13792；分類命名為：豬輪狀病毒。保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏時間是2017年4月14日；保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。