[發明專利]一種糞便保存試劑及其應用

在審

• 申請號: 201711107812.6
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN107980763A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 宋卓;王永利;黃臨迷
• 申請（專利權）人: 人和未來生物科技（長沙）有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N15/10;G01N33/50;G01N33/53;G01N33/569;G01N33/574
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司44281
• 代理人: 彭家恩,彭愿潔

技術領域

本申請涉及糞便保存領域，特別是涉及一種糞便保存試劑及其應用。

背景技術

近年來，人糞便當中脫落細胞的檢測由于無創無痛且特異性高等特征，常用于結直腸癌等疾病的初篩普查，較之化學法或免疫法的糞便隱血試驗、全直腸鏡檢查等方法更能達到“早發現、早診斷、早治療”的目的。

但人糞便中的脫落細胞含量較少、易降解、糞便樣本保存條件受限都是制約糞便脫落細胞檢測的瓶頸。其中，糞便樣本保存條件受限是指，糞便樣本通常需要在-20℃保存，以避免脫落細胞的降解或其它生化反應。但是，糞便樣本采集很多時候并不是在實驗室中進行，也就是說，采集的糞便樣本或多或少都需要在常溫下放置一段時間才能放入冰箱中-20℃保存；這個過程容易造成原本就很少量的脫落細胞進一步損失，從而影響后續檢測。

因此，亟需研發一種能夠有效保持糞便樣本中脫落細胞的糞便保存試劑，并且，糞便保存試劑必須不影響下游的糞便檢測。

發明內容

本申請的目的是提供一種新的糞便保存試劑及其應用。

為了實現上述目的，本申請采用了以下技術方案：

本申請的一方面公開了一種糞便保存試劑，包括細胞緩沖液、細胞固定劑、金屬離子螯合劑和防腐劑；細胞緩沖液為Tris-HCl，工作pH范圍為8-10；細胞固定劑選自SDS、Triton X-100和PEG-2000中的至少一種；金屬離子螯合劑為EDTA和/或EDTA-Na₂；防腐劑為NaCl。

需要說明的是，本申請的糞便保存試劑，一方面，可以有效的保存糞便中的脫落細胞，避免其降解；另一方面，糞便保存試劑的各組分不會影響后續的糞便樣本檢測。本申請的糞便保存試劑中，細胞緩沖液保持糞便樣本pH值在8-10，為脫落細胞提供了存儲環境，有效的防止脫落細胞破裂，并防止核酸降解；細胞固定劑用于固定糞便樣本中的脫落細胞；金屬離子螯合劑用于螯合糞便樣本中的金屬離子，從而抑制其中的各種酶活性，維持糞便樣本中脫落細胞的穩定性，同時也防止糞便中的游離DNA被核酸酶降解；防腐劑使糞便樣本中的微生物不致過渡增殖，防止脫落細胞被微生物破壞。本申請的糞便保存試劑通過各組分相互配合，起到了保護糞便中脫落細胞的效果，并且，本申請的糞便保存試劑可以在常溫下對人糞便樣本進行保存21天，而其中的脫落細胞不發生明顯降解；在-20℃或-80℃下可以長期保存。不過，需要注意的是，如果需要-20℃或-80℃長期保存，應盡量避免反復凍融。

還需要說明的是，糞便保存試劑中細胞緩沖液、細胞固定劑、金屬離子螯合劑和防腐劑各組分的用量，按照各組分的常規有效化學劑量使用即可，但是，在本申請的優選方案中，對各組分用量進行了特別限定，以達到更好的糞便中脫落細胞的保存效果，詳見以下方案。其中，常規有效化學劑量是指化學試劑能夠正常發揮其理化功能的劑量，排除一些極端的濃度或用量情況。

優選的，Tris-HCl的濃度為0.1-1mol/L。

優選的，SDS的濃度為0.01％-10％，Triton X-100的濃度為0.01％-10％，PEG-2000的濃度為0.01％-10％。

優選的，金屬離子螯合劑的濃度為1-150mmol/L。

優選的，NaCl的濃度為0.1-10mol/L。

本申請的一種實現方式中，優選的，細胞緩沖液的濃度為0.02mol/L、工作pH值為8；細胞固定劑的濃度為1.3％；金屬離子螯合劑的濃度為0.025mol/L；防腐劑的濃度為0.17mol/L。

本申請的另一面公開了本申請的糞便保存試劑在人糞便或其它動物糞便的保存中的應用。

由于采用以上技術方案，本申請的有益效果在于：

本申請的糞便保存試劑，通過各組分相互配合，能夠對糞便中的脫落細胞進行有效保護，避免脫落細胞降解，為糞便中脫落細胞的檢測提供了有利條件；并且，添加本申請的糞便保存試劑進行保存的糞便樣本，其混合物可以直接用于提取DNA或核酸檢測，使用簡單方便。此外，本申請的糞便保存試劑，不影響下游的糞便檢測。

附圖說明

圖1為本申請實施例中沒添加任何試劑的人糞便樣本保存1天，提取的DNA進行b-actin實時熒光PCR檢測的結果圖；

圖2為本申請實施例中沒添加任何試劑的人糞便樣本保存7天，提取的DNA進行b-actin實時熒光PCR檢測的結果圖；

圖3為本申請實施例中沒添加任何試劑的人糞便樣本保存14天，提取的DNA進行b-actin實時熒光PCR檢測的結果圖；